敲减钙离子/钙调蛋白依赖性激酶Ⅳ抑制干扰素-γ诱导C2C12细胞免疫分子的表达

发布时间：2021-01-12 04:57

　　目的探究敲减钙离子/钙调蛋白依赖性激酶Ⅳ（Ca MKⅣ）基因对炎性培养条件下C2C12细胞免疫分子表达的影响。方法采用慢病毒基因干扰技术敲减C2C12细胞的Ca MKⅣ基因,以2%马血清将C2C12细胞分化成肌管,以干扰素-γ（IFN-γ）刺激C2C12细胞,采用Real-time PCR和Western blotting检测Ca MKⅣ的表达,采用Western blotting和免疫荧光检测免疫分子主要组织相容性复合体（MHC） classⅠ（H-2Kb）、MHC classⅡ（H2-Ea）、Toll样受体3（TLR3）的表达,采用Real-time检测肌细胞分泌型促炎性细胞因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α、巨噬细胞炎性蛋白（MIP）-1α和单核细胞趋化因子（MCP）-1的基因表达。结果 IFN-γ可诱导成肌干细胞以及分化肌管表达或上调表达免疫分子MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、TLR3,同时上调C2C12细胞促炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、MIP-1α和MCP-1的基因表达量;敲减Ca MKⅣ基因导致上述上调趋势被抑制。结论敲减Ca MK... 

【文章来源】：解剖学报. 2019,50(02)北大核心

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
材料和方法
    1.主要试剂
    2.细胞系
    3.细胞培养、转染、分化和处理
    4.Real-time PCR检测CaMKⅣ和细胞因子基因表达水平
    5.Western blotting检测CaMKⅣ、MHC分子及TLR3表达
    6.免疫荧光检测MHC分子及TLR3表达
    7.统计学分析
结果
    1.CaMKⅣshRNA抑制C2C12细胞CaMKⅣ的表达
    2.敲减C2C12细胞内的CaMKⅣ基因可抑制IFN-γ诱导上调表达/表达的炎症分子H-2kb、H2-Ea和TLR3
    3.敲减C2C12细胞内的Ca MKⅣ基因可抑制IFN-γ诱导上调表达/表达的促炎性细胞因子的mRNA表达
讨论



本文编号：2972195