小鼠Lewis肺癌细胞与旋毛虫相关抗原基因sHSPs的原核表达及鉴定

发布时间：2021-01-21 01:32

　　目的对小鼠Lewis肺癌（LLC）细胞与旋毛虫（Trichinella spiralis）相关抗原基因sHSPs进行原核表达,对表达产物进行抗原性鉴定。方法利用噬菌体文库展示技术筛选旋毛虫与LLC细胞相关抗原基因并分析,获得sHSPs（DQ 986457）基因。以旋毛虫cDNA为模板,PCR扩增sHSPs基因,连接至表达载体pET-32a（+）后转化入感受态BL21（DE3）,以IPTG诱导表达,采用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白的表达及其反应原性。结果重组表达质粒pET-32a（+）-sHSPs经双酶切及测序鉴定证明克隆载体构建正确,SDS-PAGE检测其表达重组蛋白相对分子质量约为36×10³。Western blot检测重组蛋白可被抗LLC细胞多抗血清识别。结论成功构建了pET-32a（+）-sHSPs克隆载体,其表达的重组蛋白可与抗LLC细胞多抗血清反应即具有反应原性,为该蛋白的研究奠定了基础。 

【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2019,14(04)北大核心

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
材料与方法
    1 材料
        1.1 载体、菌株、虫株和细胞
        1.2 主要试剂和仪器
    2 方法
        2.1 LLC细胞与旋毛虫相关抗原基因的筛选
        2.2 引物设计合成
        2.3 sHSPs基因的扩增
        2.4 pET-32a （+） -sHSPs表达载体的构建
        2.5 pET-32a （+） -sHSPs的诱导表达
        2.6 pET-32a （+） -sHSPs表达产物的鉴定
结 果
    1 旋毛虫与LLC细胞相关抗原基因的筛选
    2 sHSPs基因的扩增
    3 pET-32a （+） -sHSPs表达载体的构建与鉴定
    4 pET-32a （+） -sHSPs的表达及鉴定
讨 论



本文编号：2990180