酵母构象型随机肽库的构建及BAFF-R/TRAF3复合物解离肽的筛选

发布时间：2021-01-25 09:23

　　BAFF（B-cell-activating factor），又称BLyS，TALL-1，THANK，zTNF4或TNFSF-13B，是1999年发现的TNF家族成员。研究发现，BAFF能促进B细胞的存活和成熟，在体液免疫中发挥重要作用，BAFF过表达会导致自身免疫性疾病。BAFF有三个受体，分别为BCMA、TACI、BAFF-R／BR3。其中BAFF-R被认为是最主要的受体。BAFF-R介导细胞内的替代NF-κB途径，BAFF三聚体诱导BAFF-R在膜上聚集，通过募集TRAF3接头分子，激活NF-κB。我们以BAFF-R／TRAF3复合物为研究对象，筛选促BAFF-R／TRAF3解离的小肽，阻断BAFF-R介导的信号通路，可以为自身免疫性疾病的治疗提供新的靶点。研究工作的结果可概括为以下几个方面： （1） 通过RT-PCR方法钓取BAFF-R胞内区和TRAF3 C端258～568aa的cDNA片段，构建重组质粒pBD-BAFF-R和pAD-TRAF3-C，利用酵母双杂交验证了两者的相互作用。构建pM-BAFF-R和pVP16-TRAF-C表达载体，共转染COS-7细胞，利用哺乳... 

【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市

【文章页数】：121 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

重组载体pBD一BAFF一R构建示意图

RAF3相互作用的研究图2重组载体pAD一TRAF3一c构建示意图2实验结果2.1获得Raji细胞总NRA利用总RNA提取试剂盒提取Raji细胞总RNA。的纯度进行分析鉴定，电泳结果显示285、185和55利用甲醛变性电泳对RNA，条带清晰(图3)。

2.3pBD一ABFF一R和pA--DTARF3一c重组质粒鉴定和序列分析将重组质粒pBD一BAFF一R用五七。Rl和BamHI双酶切，pAD一TRAF3一C用BamHI和五乞口Rl双酶切，分别得到约258Pb和936bp的片段(图6)，序列分析表明钓取的BAFF一R胞内区与TRAF3一C序列与文献报道一致(图7一11)。43Moo0︺75050025020001000936卜p258Pb500250图6重组质粒BPD一BAFF一R、pAD一TRAF3￡的酶切鉴定电泳图M.DLZo00分子量标准;l.姆D一AFF一双酶切产物;2.声D一BAFF一R3.APD一ARF3一c4.pAD一TRAF3一C双酶切产物;图7获得的BAFF一R胞内

【参考文献】：
期刊论文
[1]用改进的重叠区扩增基因拼接法构建中间缺失突变体[J]. 李成华,房海燕,邓小云,夏昆,郑多,夏家辉.  中华医学遗传学杂志. 2004(01)



本文编号：2998983