重组蛇毒锯鳞蝰素（Echistatin）原核高效表达体系的构建

发布时间：2021-02-03 11:18

　　目的 构建蛇毒锯鳞蝰素（Echistatin）的原核高效表达体系 方法 由Genebank数据库检索蛇毒锯鳞蝰素（Echistatin）的氨基酸序列，结合大肠杆菌蛋白质合成体系对氨基酸密码子使用的偏爱性，设计了Echistatin编码基因，体外人工合成编码基因DNA片段，通过适当的限制性内切酶位点插入表达载体pBV220，分别构建了Echistatin的单拷贝表达克隆、双拷贝串联表达克隆；进一步通过PCR技术构建Echistatin的融合表达基因克隆。由限制性内切酶酶切实验、DNA序列测定鉴定重组表达质粒的正确性。 将上述重组表达质粒CaCl₂法转化大肠杆菌JM109、DH5α、BL21（DE3）、BL21（DE3）plySs感受态细胞，温控诱导目的蛋白表达。SDS-PAGE及凝胶电泳分析系统检测目的蛋白的分子量、表达亘，Western—blotting检测目的蛋白的抗原抗体反应特异性。 采用超声结合溶菌酶的方法裂解大肠杆菌，检测目的蛋白的表达形式，纯化融合蛋白，血小板聚集实验测定其生物学活性。 结果 设计并合成了Echi... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PCR法鉴定重组质粒结果

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3016413