人外周血来源树突状细胞感染Her-2/neu基因重组腺相关病毒后的免疫功能分析

发布时间：2021-02-03 16:23

　　一、研究目的 本研究采用人外周血分离单核细胞,体外培养树突状细胞（dendritic cell,DC）,Her-2/neu基因重组腺相关病毒（rAAV-Her-2/neu）转染DC,并检测DC表型及Her-2的表达、与DC混合培养前后的T淋巴细胞亚群、DC刺激同种混合淋巴细胞反应的能力及DC诱导的特异性CTL对乳腺癌细胞株的杀伤作用。为临床应用rAAV-Her-2/neu转导DC的主动免疫治疗乳腺癌提供实验依据。 二、材料和方法 （一） 材料 RPMI1640培养液、PBS缓冲液（PH7.4）、人AB血清、淋巴细胞分层液（Ficoll 1.077g/ml）、重组人GM-CSF、IL-4、TNF-α、Her-2/neu基因（跨膜区）重组腺相关病毒（rAAV-Her-2/neu）、丝裂霉素（MMC）、鼠抗人单抗FITC-CD1a、FITC-CD83、PE-CD40、PE-CD80、FITC-CD86、FITC-HLA-DR、PE-CD8、FITC-CD4、PE-CD3、PE-IgG1、FITC-IgG1、APC-Her-2、国产尼龙毛、放射性同位素³

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

培养过程中DC形态的变化

DC刺激同种混合淋巴细胞反应的能力检测图2一1尼龙毛柱图2一2制备反应细胞Fig.2一1NylonwoolcolurnnFig·2一2PerParingeractnigeells(四)刺激细胞的制备将MMC用双蒸水配成300林g/ml溶液，取两组成熟Dc细胞悬液各4.5ml，各加入MMC溶液0.sml，使其终浓度为30Pg/ml。将加入MMc的两组细胞悬液，置37℃水浴3Omni，离心弃上清，沉淀细胞用，RlMll640洗一次，LXY一11型离心机，1500prm离心5面n。调整刺激细胞浓度与反应细胞(T细胞)的比例为l:5(4ox一。

渐聚集于DC细胞周围。培养2h4可观察到T淋巴细胞增殖明显，呈集落形式分布将DC包绕;培养7h8可观察到T淋巴细胞大量增殖，集落明显增多、变大，见图2一4。24h78h图2一4混和淋巴细胞反应观察Fig.2一4MixedlymPhodyeeraction不加DC的T淋巴细胞dpm值为923.6士94.6。加病毒组Dc和无病毒组Dc混合培养后的T淋巴细胞Pdm值明显高于不加DC的T淋巴细胞(尸<.005)。随着D/cT的增加，即m值逐步增加。在相同DcT/两组之间无显著性差异(尸>0.05)。

【参考文献】：
期刊论文
[1]乳腺癌的生物治疗进展[J]. 张涛.  实用癌症杂志. 2003(02)
[2]基因对肿瘤诊治的临床应用探讨──乳腺癌的基因治疗研究现状[J]. 徐兵河.  实用肿瘤杂志. 2001(02)
[3]乳腺癌的基因治疗[J]. 邓小康,姚榛祥.  国外医学(肿瘤学分册). 1999(03)



本文编号：3016811