以Ⅱ型单纯疱疹病毒gD和UL25为免疫原的疫苗的研究

发布时间：2017-04-12 22:16

  本文关键词：以Ⅱ型单纯疱疹病毒gD和UL25为免疫原的疫苗的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：单纯疱疹病毒(HSV-2)是一种世界范围内流行的嗜神经性病毒,HSV-2感染主要由性行为产生的生殖道分泌物传播,增加宫颈癌、阴茎癌、前列腺癌发病率,由于与HIV-1易于协同感染而提高了艾滋病的感染风险3~4倍。HSV-2最特殊的生物学特性包括潜伏和复发感染,在原发感染时能够逃逸宿主的免疫反应,潜伏于中枢神经系统的背根神经节,建立终身潜伏,反复发作,无法治愈。作为最易于复发的生殖器疱疹病毒,由HSV-2导致的生殖器感染主要有三个临床阶段:原发感染,复发感染以及亚临床性感染[1]。目前针对复发感染以及亚临床性感染均没有有效的药物疗法,所以疫苗的研究对于预防HSV-2的原发感染,控制潜伏HSV-2导致的复发感染和病毒渗出,以及亚临床性感染的传播有很重要的意义。尽管目前没有被批准上市的HSV-2疫苗,但多数临床实验结果证明HSV-2包膜糖蛋白g D作为介导病毒侵入宿主细胞的最关键蛋白,能够诱导机体产生高水平的中和抗体,较强的细胞免疫应答,以及在动物水平上得到了较好的攻毒后保护力。很多临床实验结果也显示了,细胞免疫应答在抑制病毒的潜伏,清除病毒和控制潜伏HSV-2导致的复发性感染的重要作用。HSV-2病毒的衣壳蛋白UL25被证明是能够诱导高水平的T细胞免疫应答,UL25含有丰富的CD8+T细胞表位。腺病毒载体可高效地传递和表达基因,以腺病毒为载体的疫苗能有效的产生特异性高水平的中和抗体,腺病毒5型(Ad 5)是目前最常用的腺病毒包装载体。本论文(1)在Balb/C动物模型上进行了攻毒剂量的摸索,确定了Balb/C致死攻毒剂量为1×10~5 PFU/只,并计算得到半数致死剂量为1.2×10~4 PFU/只。(2)构建并且成功包装了r Ad-?UL25重组腺病毒载体疫苗,将其与r Ad-g D2,r Ad-g D2?UL25一起,与传统灭活疫苗FI-HSV-2和药物Acyclovir为对照,以Balb/C为预防性疫苗的攻毒动物模型,利用先免疫后攻毒的策略,比较各组别的免疫原性以及攻毒后保护力的差别。结果表明:10倍LD_50攻毒后,r Ad-g D2,r Ad-g D2?UL25均能够诱导产生高水平的g D2特异性结合、中和抗体水平和干扰素-γ水平;r Ad-?UL25、r Ad-g D2?UL25能够产生特异性针对于LP2的干扰素-γ水平;就攻毒后保护力而言,相比于其他几组,r Ad-g D2?UL25呈现出最高的保护率以及最快的病毒清除速度。(3)在豚鼠动物模型上进行了攻毒剂量的摸索,确定了半数致死剂量为5.4×10~5 PFU/只。(4)以豚鼠作为治疗性疫苗的攻毒动物模型,利用先攻毒后免疫的策略,评价了r Ad-?UL25、r Ad-g D2、r Ad-g D2?UL25、传统灭活疫苗FI-HSV-2和药物Acyclovir对照的攻毒后保护力以及HSV-2病毒清除和病毒的潜伏情况。结果显示:r Ad-g D2?UL25在豚鼠模型中仍然表现出最高的保护率以及最快的病毒清除速度;r Ad-g D2呈现出稍高于FI-HSV-2的保护力,而r Ad-?UL25呈现阴性结果,说明了单独免疫表位?UL25能够诱导产生?UL25特异性的T细胞免疫应答却无明显的攻毒后保护力,单独免疫表位g D2能够诱导产生较好的g D特异性的免疫原性和保护力,效果却低于r Ad-g D2?UL25;当?UL25和g D两个表位偶联进行免疫时,r Ad-g D2?UL25则表现出最强的免疫原性和最好的保护力。
【关键词】：Ⅱ型单纯疱疹病毒 治疗性疫苗 Balb/C 豚鼠 腺病毒载体
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 前言10-25
• 1.1 Ⅱ型单纯疱疹病毒与生殖器疱疹10-15
• 1.1.1 HSV-2 结构与功能11-12
• 1.1.2 HSV-2 的感染12-14
• 1.1.3 HSV-2 的潜伏14
• 1.1.4 HSV-2 免疫作用机制14-15
• 1.2 HSV-2 疫苗的研究现状及其应用前景15-19
• 1.2.1 HSV-2 药物治疗现状15-16
• 1.2.2 HSV-2 疫苗预防型疫苗16-18
• 1.2.3 HSV-2 疫苗治疗型疫苗18-19
• 1.3 HSV-2 疫苗动物模型的研究19-21
• 1.4 腺病毒载体的应用21-22
• 1.5 免疫原gD与UL25的选择22-23
• 1.6 论文的立体依据及设计23-25
• 1.6.1 立题依据与创新点23-24
• 1.6.2 实验思路与设计24-25
• 第二章 实验材料25-30
• 2.1 质粒、菌株、细胞株和病毒株25
• 2.2 相关引物的设计25-26
• 2.3 短肽26
• 2.4 主要试剂以及缓冲液配制方法26-28
• 2.5 主要仪器28-29
• 2.6 实验动物29-30
• 第三章 预防型疫苗研究的实验方法与结果分析30-58
• 3.1 预防型疫苗研究的实验方法30-43
• 3.1.1 rAd-?UL25的构建、扩增、纯化及鉴定30-37
• 3.1.2 预防性疫苗动物模型的建立37-38
• 3.1.3 预防型腺病毒载体疫苗Balb/C小鼠免疫实验38-39
• 3.1.4 预防型疫苗免疫原性评价39-42
• 3.1.5 腺病毒载体疫苗Balb/C小鼠保护力实验42-43
• 3.2 预防型疫苗研究的实验结果与分析43-56
• 3.2.1 rAd-?UL25的构建、扩增、纯化、鉴定及滴度测定43-48
• 3.2.2 预防性疫苗动物模型的建立48-49
• 3.2.3 预防型疫苗免疫原性评价49-53
• 3.2.4 预防型疫苗保护力研究53-56
• 3.3 预防型疫苗研究的讨论56-58
• 第四章 治疗性疫苗研究的实验方法与结果58-67
• 4.1 治疗性疫苗研究的实验方法58-59
• 4.1.1 豚鼠模型攻毒剂量摸索和LD50的计算58
• 4.1.2 腺病毒载体疫苗豚鼠治疗性免疫实验58
• 4.1.3 病毒攻击检测生存率实验以及病理评级58-59
• 4.1.4 生殖道病毒载量检测实验59
• 4.1.5 背根部神经节病毒载量检测实验59
• 4.2 治疗性疫苗研究的实验结果59-65
• 4.2.1 豚鼠攻毒模型的建立59-61
• 4.2.2 治疗型疫苗保护力研究61-65
• 4.3 治疗性疫苗研究的讨论65-67
• 全文结论67-68
• 参考文献68-71
• 作者简介71-72
• 致谢72

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1 王紫琰;以Ⅱ型单纯疱疹病毒gD和UL25为免疫原的疫苗的研究[D];吉林大学;2016年

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本文编号：302181