重组腺相关病毒rAAV生产平台的建立及初步应用

发布时间：2021-02-08 17:24

　　AAV-2是目前人类临床研究中最有前途的基因治疗载体之一。本论文报道了重组腺相关病毒rAAV-2的包装生产、纯化、检测方法即生产平台的建立及初步应用。利用重组质粒pAAV／EGFP与包装／帮助质粒pDG共转染人胚肾细胞HEK293，生产重组的AAV病毒。纯化后的病毒基于pAAV上的WPRE序列建立定量Realtime-PCR方法检测rAAV滴度。结果显示：与传统的检测AAV滴度的方法相比，qRealtime-PCR方法更为方便、快速、通用，而且提高了重复性和准确性。使用两种不同的纯化方法—1)肝素柱纯化法；2)氯仿纯化法—纯化粗产物获得纯度较高的重组腺相关病毒rAAV。比较二种方法：从两种方法纯化得来的重组腺相关病毒rAAV分别以不同滴度感染HEK293，观察EGFP的表达。结果显示：从感染活性看，两种方法的纯化产物活性相近；从经济、简便、省时方面看，氯仿纯化法优于肝素柱纯化法。 应用RT-PCR技术从肝癌病人血细胞中扩增出能够表达IFNa1的IFNA1cDNA，克隆到pAAV载体上进行测序，构建了重组质粒pAAV／IFNA1，转染HEK293细胞，48小时后收获细胞，Weste... 

【文章来源】：四川大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
中文摘要
英文摘要
前言
第一章 rAAV-2生产平台即AAV包装生产、纯化方法的的确立
    摘要
    引言
    材料和方法
    结果
    讨论
第二章 rAAV／IFNA1病毒对AD38细胞的转导
    摘要
    引言
    材料和方法
    结果
    讨论
总结
参考文献
文献综述
    腺相关病毒AAV用于基因治疗的研究进展
    参考文献
在读期间发表论文
声明


【参考文献】：
期刊论文
[1]一种快速高效分离和纯化重组腺病毒伴随病毒载体的方法[J]. 吴小兵,董小岩,伍志坚,屈建国,侯云德.  科学通报. 2000(19)
[2]具有AAV载体包装功能的重组HSV的产生[J]. 伍志坚,吴小兵,侯云德.  科学通报. 1999(05)



本文编号：3024279