脐带间充质干细胞对小胶质细胞活化表型的调节
发布时间：2021-02-13 03:18
目的:探讨脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）是否以外分泌的方式调节小胶质细胞M1/M2极化表型,并且探讨其机制。方法:提取原代脐带间充质干细胞,并制备含有hUC-MSCs分泌的全部营养因子的条件培养基（hUC-MSCs-CM）。实验分为:空白对照组,单纯LPS刺激组,单纯hUC-MSCs-CM刺激组,LPS、hUC-MSCs-CM共刺激组,刺激24 h后收集上清和蛋白。ELISA方法检测上清中TNF-α、IL-6浓度,Western blot检测CD86、精氨酸酶1（Arg1）、PI3K的蛋白表达量。结果:①LPS诱导BV2细胞分泌TNF-α、IL-6因子增多,LPS、hUC-MSCs-CM共刺激组与LPS组相比,TNF-α、IL-6表达明显降低（P <0. 05）;②LPS刺激组BV2细胞M1型标志物CD86表达明显增多,hUC-MSCs-CM共刺激组与LPS组相比CD86表达降低（P <0. 05）。LPS、hUC-MSCs-CM共刺激组M2型标志物Arg1表达增多（P <0. 05）;③LPS、hUC-MSCs-CM共刺激组上调PI3K磷酸化水平（P <...
【文章来源】：中国免疫学杂志. 2019,35(07)北大核心
【文章页数】：4 页
【图文】：
显微镜下观察第三代hUC-MSCs的形态特征(×100)
均一地表达基质细胞相关的表面标记CD73、CD90、CD105，不表达CD19，不表达造血干细胞表面标记CD11b、CD34，不表达人类白细胞共同抗原CD45以及MHCⅡ类分子HLA-DＲ，符合间充质干细胞的表型特征(图2)。2.3hUC-MSCs-CM和LPS对BV2分泌TNF-α和IL-6的影响与空白对照组相比，LPS组分泌TNF-α和IL-6明显增高，LPS+MSCs组与单纯LPS组相比TNF-α和IL-6水平明显降低，且差异均有统计学意义(P＜0.05)，见图3。图1显微镜下观察第三代hUC-MSCs的形态特征(×100)Fig．1MicroscopemorphologicalcharactersofthirdgenerationhUC-MSCs(×100)图2培养至第二代的hUC-MSCs流式细胞仪检测表面抗原Fig．2CultivatedtosecondgenerationofhUC-MSCsinFCMinstrumenttestingsurfaceantigen图3BV2细胞分泌TNF-α和IL-6的变化Fig．3ChangesofTNF-αandIL-6secretedbyBV2cellsNote:A.ChangesofsecretoryTNF-αlevelinBV2cells.n=3.*.P＜0.05vsLPSgroup;B.ChangesofsecretoryIL-6levelinBV2cells.n=3.#.P＜0.05vsLPSgroup.2.4hUC-MSCs-CM逆转LPS诱导的M1和M2表型改变CD86为活化小胶质细胞M1型特异性标志物，与空白对照组相比，LPS刺激24h后，CD86表达明显上调(P＜0.05)，但LPS+MSCs联合刺激组与单纯LPS组相比，CD86表达降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，Arg1为M2型活化小胶质细胞的特异性标志物，Western结果显示MSCs组、LPS+MSCs组与空白对照组相比，Arg1蛋白表达量明显上调，差异有统计学意义(P＜0.05)，见图4、5。2.5hUC-MSCs-CM对PI3K信号通路的影响Western结果显示，与空白对照组相比，MSCs组、LPS+MSCs组的PI3K磷酸化水平明显上调，差异有统计学意义(P＜0.05)，见图6。图4CD86蛋白表达水平Fig．4CD86proteinexpressionlevelNote:n=3.*
HLA-DＲ，符合间充质干细胞的表型特征(图2)。2.3hUC-MSCs-CM和LPS对BV2分泌TNF-α和IL-6的影响与空白对照组相比，LPS组分泌TNF-α和IL-6明显增高，LPS+MSCs组与单纯LPS组相比TNF-α和IL-6水平明显降低，且差异均有统计学意义(P＜0.05)，见图3。图1显微镜下观察第三代hUC-MSCs的形态特征(×100)Fig．1MicroscopemorphologicalcharactersofthirdgenerationhUC-MSCs(×100)图2培养至第二代的hUC-MSCs流式细胞仪检测表面抗原Fig．2CultivatedtosecondgenerationofhUC-MSCsinFCMinstrumenttestingsurfaceantigen图3BV2细胞分泌TNF-α和IL-6的变化Fig．3ChangesofTNF-αandIL-6secretedbyBV2cellsNote:A.ChangesofsecretoryTNF-αlevelinBV2cells.n=3.*.P＜0.05vsLPSgroup;B.ChangesofsecretoryIL-6levelinBV2cells.n=3.#.P＜0.05vsLPSgroup.2.4hUC-MSCs-CM逆转LPS诱导的M1和M2表型改变CD86为活化小胶质细胞M1型特异性标志物，与空白对照组相比，LPS刺激24h后，CD86表达明显上调(P＜0.05)，但LPS+MSCs联合刺激组与单纯LPS组相比，CD86表达降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，Arg1为M2型活化小胶质细胞的特异性标志物，Western结果显示MSCs组、LPS+MSCs组与空白对照组相比，Arg1蛋白表达量明显上调，差异有统计学意义(P＜0.05)，见图4、5。2.5hUC-MSCs-CM对PI3K信号通路的影响Western结果显示，与空白对照组相比，MSCs组、LPS+MSCs组的PI3K磷酸化水平明显上调，差异有统计学意义(P＜0.05)，见图6。图4CD86蛋白表达水平Fig．4CD86proteinexpressionlevelNote:n=3.*.P＜0.05vsLPSgroup.图5Arg1蛋白表达水平Fig．5Arg1proteinexpressionlevelNote:n=3.*.P＜0.05vsothergroups.图6PI3K蛋白表达水平Fig．6PI3Kproteine
本文编号：3031882
【文章来源】：中国免疫学杂志. 2019,35(07)北大核心
【文章页数】：4 页
【图文】：
显微镜下观察第三代hUC-MSCs的形态特征(×100)
均一地表达基质细胞相关的表面标记CD73、CD90、CD105，不表达CD19，不表达造血干细胞表面标记CD11b、CD34，不表达人类白细胞共同抗原CD45以及MHCⅡ类分子HLA-DＲ，符合间充质干细胞的表型特征(图2)。2.3hUC-MSCs-CM和LPS对BV2分泌TNF-α和IL-6的影响与空白对照组相比，LPS组分泌TNF-α和IL-6明显增高，LPS+MSCs组与单纯LPS组相比TNF-α和IL-6水平明显降低，且差异均有统计学意义(P＜0.05)，见图3。图1显微镜下观察第三代hUC-MSCs的形态特征(×100)Fig．1MicroscopemorphologicalcharactersofthirdgenerationhUC-MSCs(×100)图2培养至第二代的hUC-MSCs流式细胞仪检测表面抗原Fig．2CultivatedtosecondgenerationofhUC-MSCsinFCMinstrumenttestingsurfaceantigen图3BV2细胞分泌TNF-α和IL-6的变化Fig．3ChangesofTNF-αandIL-6secretedbyBV2cellsNote:A.ChangesofsecretoryTNF-αlevelinBV2cells.n=3.*.P＜0.05vsLPSgroup;B.ChangesofsecretoryIL-6levelinBV2cells.n=3.#.P＜0.05vsLPSgroup.2.4hUC-MSCs-CM逆转LPS诱导的M1和M2表型改变CD86为活化小胶质细胞M1型特异性标志物，与空白对照组相比，LPS刺激24h后，CD86表达明显上调(P＜0.05)，但LPS+MSCs联合刺激组与单纯LPS组相比，CD86表达降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，Arg1为M2型活化小胶质细胞的特异性标志物，Western结果显示MSCs组、LPS+MSCs组与空白对照组相比，Arg1蛋白表达量明显上调，差异有统计学意义(P＜0.05)，见图4、5。2.5hUC-MSCs-CM对PI3K信号通路的影响Western结果显示，与空白对照组相比，MSCs组、LPS+MSCs组的PI3K磷酸化水平明显上调，差异有统计学意义(P＜0.05)，见图6。图4CD86蛋白表达水平Fig．4CD86proteinexpressionlevelNote:n=3.*
HLA-DＲ，符合间充质干细胞的表型特征(图2)。2.3hUC-MSCs-CM和LPS对BV2分泌TNF-α和IL-6的影响与空白对照组相比，LPS组分泌TNF-α和IL-6明显增高，LPS+MSCs组与单纯LPS组相比TNF-α和IL-6水平明显降低，且差异均有统计学意义(P＜0.05)，见图3。图1显微镜下观察第三代hUC-MSCs的形态特征(×100)Fig．1MicroscopemorphologicalcharactersofthirdgenerationhUC-MSCs(×100)图2培养至第二代的hUC-MSCs流式细胞仪检测表面抗原Fig．2CultivatedtosecondgenerationofhUC-MSCsinFCMinstrumenttestingsurfaceantigen图3BV2细胞分泌TNF-α和IL-6的变化Fig．3ChangesofTNF-αandIL-6secretedbyBV2cellsNote:A.ChangesofsecretoryTNF-αlevelinBV2cells.n=3.*.P＜0.05vsLPSgroup;B.ChangesofsecretoryIL-6levelinBV2cells.n=3.#.P＜0.05vsLPSgroup.2.4hUC-MSCs-CM逆转LPS诱导的M1和M2表型改变CD86为活化小胶质细胞M1型特异性标志物，与空白对照组相比，LPS刺激24h后，CD86表达明显上调(P＜0.05)，但LPS+MSCs联合刺激组与单纯LPS组相比，CD86表达降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，Arg1为M2型活化小胶质细胞的特异性标志物，Western结果显示MSCs组、LPS+MSCs组与空白对照组相比，Arg1蛋白表达量明显上调，差异有统计学意义(P＜0.05)，见图4、5。2.5hUC-MSCs-CM对PI3K信号通路的影响Western结果显示，与空白对照组相比，MSCs组、LPS+MSCs组的PI3K磷酸化水平明显上调，差异有统计学意义(P＜0.05)，见图6。图4CD86蛋白表达水平Fig．4CD86proteinexpressionlevelNote:n=3.*.P＜0.05vsLPSgroup.图5Arg1蛋白表达水平Fig．5Arg1proteinexpressionlevelNote:n=3.*.P＜0.05vsothergroups.图6PI3K蛋白表达水平Fig．6PI3Kproteine
本文编号：3031882
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