原子力显微镜单分子力谱研究ICAM-1/CD11b相互作用及药物干预的影响

发布时间：2021-02-15 12:59

　　目的利用绿色荧光蛋白（GFP）标记人细胞间黏附分子-1（ICAM-1）,观察GFP是否影响ICAM-1在细胞膜表面的定位,实现ICAM-1可视化。应用原子力显微镜（AFM）单分子力谱研究ICAM-1/CD11b相互作用,并探讨瑞舒伐他汀（RSV）及单抗类药物干预的影响。方法从人脐静脉内皮细胞（HUVEC）中提取总RNA,设计合成PCR引物（两端分别含有Bam HⅠ、HindⅢ特异性酶切位点）,使用RT-PCR扩增获取ICAM-1cDNA编码区序列,经测序分析筛选正确序列,与pEGFP-N1表达载体相接,即得到基于GFP的重组质粒pICAM-1-GFP,脂质体介导转染COS-7细胞,通过荧光显微镜观察融合蛋白pICAM-1-GFP在COS-7上的定位。AFM单分子力谱测量该细胞模型上单对黏附分子ICAM-1/CD11b的相互作用力值,应用RSV及抗ICAM-1单克隆抗体干预,检测黏附力值是否有变化。结果序列分析RT-PCR扩增获得的片段为人ICAM-1的cDNA编码区,pICAM-1-GFP发出绿色荧光定位于COS-7细胞表面。单对黏附分子ICAM-1/CD11b的相互作用力值约为42 ... 

【文章来源】：军事医学. 2019,43(01)北大核心

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本文编号：3034893