CML基因疫苗的构建及表达bcr-abl融合基因片段的SP2/O细胞系的建立

发布时间：2021-02-20 11:57

　　慢性髓性白血病（Chronic myeloid leukemia, CML）是一种起源于多能干细胞的恶性增生性疾病，其最重要的细胞遗传学特征是存在特异性的Ph染色体，第9号染色体上的原癌基因c-ab1易位到第22号染色体的断点集中区（bcr）形成bcr-ab1融合基因，编码bcr-ab1融合蛋白(p210^bcr-ab1)。p210^bcr-ab1具有高酪氨酸激酶活性，与细胞恶性转化密切相关，而p210^bcr-ab1的抗原性限定在其融合位点内，这段氨基酸序列在正常细胞中不存在，因此该序列可作为肿瘤特异性抗原。本研究从以下三个方面探索利用bcr-ab1融合基因片段制备CML基因疫苗的研究。 一、慢性髓性白血病bcr-ab1融合基因片段的克隆与原核表达的研究 以慢性髓性白血病细胞株K562细胞总RNA为模板，采用RT-PCR技术扩增包含bcr-ab1融合位点周围的基因片段，定向克隆到pGEX-6P-1载体谷光甘肽-S-转移酶（GST）的下游。将重组质粒转化大肠杆菌BL₂₁菌株，以1.0mmol／... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

RT-PCR扩增饮矛曲l融合基因片段

图I.ZPGEx一bcr-abl酶切鉴定g.1.2RusultsofPGEX一阮卜abldigestedwithrestrictivee‘守me1.功NA一HindlllMarker;2.EcoRI单酶切;3.EcoRI单酶切重组质粒:4.Xhol单酶切重组质粒;

1.2.4重组菌的诱导表达及SDSPAGE鉴定取诱导的重组菌裂解产物进行SDS.PAGE分析，考马斯亮蓝染色，脱色液脱色，同时取诱导的非重组的pGEx-6P，1菌体裂解物作为对照。结果表明(见图1.3)，诱导的重组菌裂解产物在约42KD的位置出现一条特异性蛋白条带，而诱导的非重组pGEX一6P一1菌体裂解物只在约26KD处出现一条与GST理论值一致的条带。图1.3重组菌体裂解产物SDS一PAGE鉴定Figurel.3SDS一PAGEanalysisoftherecOmbinantProteinexPressedinE.eoli低分子量标准蛋白质Marker;2.未经护TG诱导的重组质粒;3.未经IPTG诱导的非重组的pGEx一6P一1;4.经IPTG诱导的非重组的pGEx一6P一1;5.经IPTG诱导的重组质粒1。2一5间接免疫荧光法测定p42bCr-t从融合蛋白具有特异抗原性

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3042735