乙肝病毒DNA在人淋巴细胞、精子与小鼠卵母细胞中的存在与整合

发布时间：2021-02-22 16:27

　　背景 根据流行病学资料，乙肝病毒携带者目前在世界约有2.2亿，在我国为1.2亿左右，约占全国人口的10％。HBV具有严格的嗜肝特异性，但是科学家们在肝外组织和细胞如胰脏、肾脏、皮肤、心脏、骨髓、淋巴细胞甚至男性生殖细胞内发现HBV以游离和／或整合的方式存在。机体细胞内HBV的存在可导致持续感染；HBV DNA整合可诱发多种染色体畸变；若突变激活癌基因，有可能诱发癌变。由于该病危害性大，流行面广，因此其传播途径、发病机理及诊疗手段的研究一直是各国政府和科学家们高度重视的课题。 目的与意义 由于T淋巴细胞在机体清除HBV急慢性感染中发挥重要作用，而HBV DNA整合到精、卵细胞染色体上，有可能在亲婴间进行垂直传播，因此进一步研究患者淋巴细胞与精、卵细胞内HBV DNA的存在与整合，无论是对乙肝病毒的基础理论研究还是临床防治实践都具有重要意义。 材料与方法 材料：①慢性乙肝患者外周血淋巴细胞与精子样本；②小鼠卵母细胞；③pBR322-HBV DNA质粒。方法：①用PCR与电泳技术检测淋巴细胞和精子样本中是否存在HBV DNA；②进行外周血培养制备淋巴细胞染色体，用荧光原位杂交技术... 

【文章来源】：汕头大学广东省

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
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英文摘要
第一部分 乙肝病毒DNA在人淋巴细胞与精子中的存在与整合
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 材料
        2.2 方法
            2.2.1 HBV DNA的转化、提取、鉴定和定量
            2.2.2 HBV DNA在人淋巴细胞与精子DNA中的存在
                2.2.2.1 淋巴细胞和精子DNA的提取
                2.2.2.2 淋巴细胞和精子DNA的PCR实验
            2.2.3 HBV DNA在人淋巴细胞染色体上的整合
                2.2.3.1 外周血培养及淋巴细胞染色体的制备
                2.2.3.2 荧光原位杂交探针的制备
                2.2.3.3 荧光原位杂交探针纯化和测定
                2.2.3.4 淋巴细胞染色体与HBV DNA探针FISH实验
    3 结果
        3.1 HBV DNA的鉴定和定量结果
        3.2 乙肝患者淋巴细胞和精子DNA的PCR结果
        3.3 荧光原位杂交探针的定量结果
        3.4 淋巴细胞染色体与HBV DNA探针FISH结果
    4 讨论
        4.1 HBV DNA在淋巴细胞中的存在与整合
        4.2 HBV DNA在人精子DNA中的存在
        4.3 淋巴细胞与精子样本HBV DNA检测结果比较分析
        4.4 创新与不足
        4.5 展望
第二部分 乙肝病毒DNA在小鼠卵母细胞中的存在与整合
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 材料
        2.2 方法
            2.2.1 卵母细胞超排
            2.2.2 卵母细胞与HBV DNA共培养
            2.2.3 HBV DNA在卵母细胞DNA中的存在
                2.2.3.1 卵母细胞中HBV DNA的提取
                2.2.3.2 斑点和Southern杂交探针的制备
                2.2.3.3 洗液样本的斑点杂交实验
                2.2.3.4 卵母细胞DNA的PCR实验
                2.2.3.5 PCR产物Southern杂交实验
            2.2.4 HBV DNA在卵母细胞染色体上的整合
                2.2.4.1 卵母细胞染色体的制备
                2.2.4.2 卵母细胞染色体与HBV DNA探针FISH实验
    3 结果
        3.1 洗液斑点杂交结果
        3.2 卵母细胞DNA的PCR实验结果
        3.3 卵母细胞DNA扩增产物Southern结果
        3.4 卵母细胞染色体与HBV DNA探针FISH结果
    4 讨论
        4.1 HBV DNA在卵母细胞DNA中的存在
        4.2 HBV DNA在卵母细胞染色体上的整合
        4.3 创新与不足
        4.4 展望
            4.4.1 肝病毒基因母婴垂直传播新途经的研究
            4.4.2 以卵母细胞作载体进行转基因研究
    5 全文小结
    6 参考文献
附录1: 主要缩略语
附录2: 主要混合液及培养基
综述
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]乙型肝炎病毒的父儿传播与肝外定位[J]. 王珊珊,姜普林,彭桂福,曾年华,王志斌.  中华肝脏病杂志. 1999(04)
[2]乙型肝炎病毒对精子染色体的影响[J]. 黄建民,黄天华,邱焕英,邱杰文,方小武,陈晓红,庄天罡,蔡树深,王永华,刘鸿禧,杨风霞,刘卫东.  癌变.畸变.突变. 1999(02)
[3]乙型肝炎病毒感染经精子传播的可能性研究[J]. 赵连三,刘晓松,张智翔,王锦蓉,刘丽,雷秉钧.  中华传染病杂志. 1998(03)
[4]HBV感染的单核细胞分泌TNFα和PGE2的改变及其意义探讨[J]. 光丽霞,顾长海.  中华传染病杂志. 1995(04)
[5]乙型肝炎病毒父婴传播途径的初步研究[J]. 张丽云,方之勋,郑兆,刘新钰,龚希平,吴玉祥.  中华传染病杂志. 1994(04)
[6]乙型肝炎病毒与肝细胞癌变[J]. 琦祖和.  基础医学与临床. 1993(04)



本文编号：3046258