小鼠PTA1/CD226与配体分子相互作用结构域的研究

发布时间：2021-03-15 04:32

　　目的：阐明小鼠PTA1（mPTA1）／mCD226对杀伤性T淋巴细胞（CTL）分化的影响。确定mPTA1分子与mTage4参与相互作用的结构域，以深入研究这两种分子的功能。 方法：①利用小鼠PTA1-hIgFc真核表达载体表达并纯化mPTA1融合蛋白，免疫家兔，获得抗mPTA1多克隆抗体，并用偶联mPTA1-Fc融合蛋白的Sepharose-4B亲和层析柱纯化多克隆抗体。间接免疫荧光染色及流式细胞术鉴定多克隆抗体的特异性。②通过混合淋巴细胞培养（MLC）诱导产生CTL效应细胞，以⁵¹Cr释放实验检测mPTA1多克隆抗体在MLC中对T淋巴细胞分化及杀伤功能的影响。③扩增编码mTage4全长分子和mPTA1、hICAM-1分子不同结构域的DNA序列，构建含mTage4和mPTA1不同结构域编码序列的截短体以及mPTA1／hICAM-1荧光蛋白嵌合体分子基因的真核表达载体，并转染COS-7真核细胞，通过激光扫描共聚焦显微镜研究这两种分子间的相互作用。 结果：①获得了mPTA1-hIgFc融合蛋白和针对mPTA1胞膜外区的多克隆抗体，该抗体能与转染细胞表面mP... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PATI和LAF一1复合物形成动态变化模式图

mPATI一Fc融合蛋白及mPATI胞膜外区的SDS一APGE电泳分析

间接EUSA法检测免疫兔血清抗mPATI的效价F191一2Thetiltersofrabbitnati·mPATIsearidentifiedbyindireetELISA


本文编号：3083565