鼠伤寒沙门氏菌群体感应复苏oxyR基因缺失引起的VBNC状态
发布时间：2021-03-18 14:12
探讨鼠伤寒沙门氏菌oxyR基因缺失株引起的VBNC状态及其与群体感应的关系。运用同源重组的方法构建oxyR基因无痕缺失的鼠伤寒沙门氏菌并检测该菌株对H2O2的敏感性;将oxyR基因缺失株和亲本株（WT）涂布或滴于LB固体培养基,观察其是否生长及其浓度依赖性生长情况;用swimming和swarming平板检测oxyR基因缺失株和WT的运动能力;检测固体培养基和液体培养基中沙门氏菌分解H2O2的能力。成功构建了oxyR无痕缺失菌株;oxyR基因缺失株在0.1 mmol/L H2O2的LB平板上形成的菌苔发生了变形,在1 mmol/L H2O2的LB平板上不能生长,而WT均能生长;6×106和6×105 cfu/mL的WT涂布于LB平板上能长满菌苔,而等量的oxyR缺失株不能生长菌落;不同浓度的WT滴于LB平板均能形成菌苔,而oxyR缺失株仅在OD600
【文章来源】：微生物学杂志. 2019,39(01)
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
PCＲ扩增Fig．1Theamplificationoffragmentsusedtoconstruct
敏感性oxyＲ是细菌抗氧化作用的关键调控因子，调控众多参与抗氧化作用的基因转录，包括过氧化氢酶(Kat)的表达。所以oxyＲ基因的缺失将导致细菌对H2O2的敏感性增加，细菌抗氧化作用能力的减弱。因此，将3μLOD600为0．1沙门氏菌WT和oxyＲ基因缺失株菌液滴于含有不同浓度H2O2的LB平板上，观察其生长情况(图2)。在0．1mmol/LH2O2的LB平板上，WT生长正常，而oxyＲ基因缺失株的菌苔边缘由均匀圆润变为锯齿不规则状;当H2O2达到1mmol/L时，图2H2O2敏感性实验Fig．2H2O2sensitiveassayA、B、C分别表示H2O2的浓度为0、0．1、1mmol/LA:0mmol/LH2O2;B:0．1mmol/LH2O2;C:1mmol/LH2O2WT的菌苔由均匀圆润变为锯齿不规则状，而oxyＲ基因缺失株已不能生长。实验结果表明，oxyＲ基因的缺失导致其H2O2敏感性增加，抗氧化能力降低，在多种细菌中有类似结果［24-26］。2．3oxyＲ基因缺失使沙门氏菌进入VBNC状态在实验过程中，发现ΔoxyＲ株能在液体培养基中正常生长，而当其从液体培养基转接到固体培养基时，则不能生长。这可能是由于oxyＲ基因的缺失导致其抗氧化能力减弱，从液体培养基转接到固体培养基时，在新的氧化压力下，细菌进入了VBNC状态。因此，将6×106和6×105cfu/mL涂布于LB平板上培养。由图3可知，WT在LB平板上生长正常，由于活菌数高，整个平板长满了菌苔;而oxyＲ缺失株在LB平板上没有菌落生成。结果表明，oxyＲ基因的缺失导致沙门氏菌进入了VBNC状态。图3WT和oxyＲ株在平板生长情况Fig．3ThegrowthofWTandoxyＲmutan
状态在实验过程中，发现ΔoxyＲ株能在液体培养基中正常生长，而当其从液体培养基转接到固体培养基时，则不能生长。这可能是由于oxyＲ基因的缺失导致其抗氧化能力减弱，从液体培养基转接到固体培养基时，在新的氧化压力下，细菌进入了VBNC状态。因此，将6×106和6×105cfu/mL涂布于LB平板上培养。由图3可知，WT在LB平板上生长正常，由于活菌数高，整个平板长满了菌苔;而oxyＲ缺失株在LB平板上没有菌落生成。结果表明，oxyＲ基因的缺失导致沙门氏菌进入了VBNC状态。图3WT和oxyＲ株在平板生长情况Fig．3ThegrowthofWTandoxyＲmutantstrainonLBplatesA:接种6×106cfu/mL，WT株;B:接种6×105cfu/mL，WT株;C:接种6×106cfu/mL，ΔoxyＲ株;D:接种6×105cfu/mL，ΔoxyＲ株A:6×106cfu/mL，WT;B:6×105cfu/mL，WT;C:6×106cfu/mL，ΔoxyＲ;D:6×105cfu/mL，ΔoxyＲ2．4沙门氏菌群体感应能复苏VBNC状态虽然oxyＲ基因的缺失导致沙门氏菌进入了VBNC状态，但是我们也发现ΔoxyＲ株能从固体培养基上取种划线培养于新鲜LB平板，所以我们猜想当ΔoxyＲ株细菌浓度达到一定时，VBNC状态能够复苏。因此，制备OD600为100、10－1、10－2、10－3、10－4和10－5的WT和ΔoxyＲ株菌液，各取3μL，直接滴于LB平板。生长结果如图4所示，WT在所有浓度下均能生长为菌苔，而oxyＲ基因缺失株仅在浓度极高，即OD600为100和10－11期廖何斌等:鼠伤寒沙门氏菌群体感应复苏oxyＲ基因缺失引起的VBNC状态37
【参考文献】：
期刊论文
[1]细菌抗氧化系统-oxyR调节子研究进展[J]. 汪保卫,施庆珊,欧阳友生,陈仪本. 微生物学报. 2008(11)
本文编号：3088462
【文章来源】：微生物学杂志. 2019,39(01)
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
PCＲ扩增Fig．1Theamplificationoffragmentsusedtoconstruct
敏感性oxyＲ是细菌抗氧化作用的关键调控因子，调控众多参与抗氧化作用的基因转录，包括过氧化氢酶(Kat)的表达。所以oxyＲ基因的缺失将导致细菌对H2O2的敏感性增加，细菌抗氧化作用能力的减弱。因此，将3μLOD600为0．1沙门氏菌WT和oxyＲ基因缺失株菌液滴于含有不同浓度H2O2的LB平板上，观察其生长情况(图2)。在0．1mmol/LH2O2的LB平板上，WT生长正常，而oxyＲ基因缺失株的菌苔边缘由均匀圆润变为锯齿不规则状;当H2O2达到1mmol/L时，图2H2O2敏感性实验Fig．2H2O2sensitiveassayA、B、C分别表示H2O2的浓度为0、0．1、1mmol/LA:0mmol/LH2O2;B:0．1mmol/LH2O2;C:1mmol/LH2O2WT的菌苔由均匀圆润变为锯齿不规则状，而oxyＲ基因缺失株已不能生长。实验结果表明，oxyＲ基因的缺失导致其H2O2敏感性增加，抗氧化能力降低，在多种细菌中有类似结果［24-26］。2．3oxyＲ基因缺失使沙门氏菌进入VBNC状态在实验过程中，发现ΔoxyＲ株能在液体培养基中正常生长，而当其从液体培养基转接到固体培养基时，则不能生长。这可能是由于oxyＲ基因的缺失导致其抗氧化能力减弱，从液体培养基转接到固体培养基时，在新的氧化压力下，细菌进入了VBNC状态。因此，将6×106和6×105cfu/mL涂布于LB平板上培养。由图3可知，WT在LB平板上生长正常，由于活菌数高，整个平板长满了菌苔;而oxyＲ缺失株在LB平板上没有菌落生成。结果表明，oxyＲ基因的缺失导致沙门氏菌进入了VBNC状态。图3WT和oxyＲ株在平板生长情况Fig．3ThegrowthofWTandoxyＲmutan
状态在实验过程中，发现ΔoxyＲ株能在液体培养基中正常生长，而当其从液体培养基转接到固体培养基时，则不能生长。这可能是由于oxyＲ基因的缺失导致其抗氧化能力减弱，从液体培养基转接到固体培养基时，在新的氧化压力下，细菌进入了VBNC状态。因此，将6×106和6×105cfu/mL涂布于LB平板上培养。由图3可知，WT在LB平板上生长正常，由于活菌数高，整个平板长满了菌苔;而oxyＲ缺失株在LB平板上没有菌落生成。结果表明，oxyＲ基因的缺失导致沙门氏菌进入了VBNC状态。图3WT和oxyＲ株在平板生长情况Fig．3ThegrowthofWTandoxyＲmutantstrainonLBplatesA:接种6×106cfu/mL，WT株;B:接种6×105cfu/mL，WT株;C:接种6×106cfu/mL，ΔoxyＲ株;D:接种6×105cfu/mL，ΔoxyＲ株A:6×106cfu/mL，WT;B:6×105cfu/mL，WT;C:6×106cfu/mL，ΔoxyＲ;D:6×105cfu/mL，ΔoxyＲ2．4沙门氏菌群体感应能复苏VBNC状态虽然oxyＲ基因的缺失导致沙门氏菌进入了VBNC状态，但是我们也发现ΔoxyＲ株能从固体培养基上取种划线培养于新鲜LB平板，所以我们猜想当ΔoxyＲ株细菌浓度达到一定时，VBNC状态能够复苏。因此，制备OD600为100、10－1、10－2、10－3、10－4和10－5的WT和ΔoxyＲ株菌液，各取3μL，直接滴于LB平板。生长结果如图4所示，WT在所有浓度下均能生长为菌苔，而oxyＲ基因缺失株仅在浓度极高，即OD600为100和10－11期廖何斌等:鼠伤寒沙门氏菌群体感应复苏oxyＲ基因缺失引起的VBNC状态37
【参考文献】：
期刊论文
[1]细菌抗氧化系统-oxyR调节子研究进展[J]. 汪保卫,施庆珊,欧阳友生,陈仪本. 微生物学报. 2008(11)
本文编号：3088462
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