提高细胞上清液中甲状旁腺激素水平对甲状旁腺细胞培养及分泌功能有优化作用
发布时间：2021-03-29 16:44
背景:端粒酶反转录酶是一种重要的调控细胞分化增殖的酶,其具有多种生物活性。研究表明,经过h TERT基因修饰后可能有利于提高甲状旁腺细胞增殖能力的存活能力和功能,能够起到对甲状旁腺细胞体外培养的优化作用。目的:用负载h TERT目的基因的反转录病毒PLXSN转染大鼠甲状旁腺细胞,观察细胞生物学特性及细胞分泌功能变化,以探讨甲状旁腺细胞培养更为优化的方法。方法:28只雄性Wistar大鼠,由北京维通利华动物实验技术有限公司提供,经天津医科大学动物实验伦理委员会批准（批准号为2017-0652）。大鼠麻醉后切取甲状旁腺并通过病理学确认,用胶原酶Ⅱ消化获得甲状旁腺细胞,并经过Westernblot检测钙敏感性受体、甲状旁腺激素和神经胶质细胞缺失转录因子（GCM-2）进行鉴定。将鉴定后细胞分为正常的甲状旁腺细胞组、空病毒组和h TERT转染组。h TERT转染后3d,通过RT-PCR和Western blot检测各组细胞中h TERT基因和蛋白相对表达;应用细胞生长曲线和CCK-8法观察细胞生长情况;采用流式细胞术测定细胞周期分布;使用酶联免疫吸附测定法检测细胞的上清液中甲状旁腺激素的浓度变化...
【文章来源】：中国组织工程研究. 2019,23(25)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
甲状旁腺细胞标志分子表达水平Figure2Levelsofsurfacemarkersofparathyroidcellsβ-actin
赴??で?呒跋赴?鲋郴钚?与正常的甲状旁腺细胞和含有空载病毒的细胞相比，hTERT基因转染显著提高了甲状旁腺细胞的增殖活性，差异有显著性意义(P<0.05)，见表3。实验采用CCK-8法绘制了甲状旁腺细胞的生长曲线。hTERT基因转染组中甲状旁腺细胞的增殖活性在培养72h后显著快于正常对照组和空载病毒组中的细胞增殖速度，差异有显著性意义(P<0.05)，见图5。图注：图A为细胞培养当天；B为细胞培养2d；C为细胞培养3d。经过鉴定所培养细胞为甲状旁腺细胞的主细胞。图1大鼠甲状旁腺细胞的形态特点(×40)Figure1Morphologyofratparathyroidcells(×40)表1甲状旁腺细胞特异性标记物不同时间表达(x_±s，n=3)Table1Specialmarkersofparathyroidcellsatdifferenttime时间钙敏感性受体甲状旁腺激素神经胶质细胞缺失转录因子7d0.51±0.070.64±0.050.49±0.0614d1.18±0.12a1.10±0.10a1.23±0.11a21d1.66±0.14ab1.82±0.17ab1.79±0.18ab表注：与7d时比较，aP<0.05；与14d时比较，bP<0.05。7d14d21d钙敏感性受体甲状旁腺激素神经胶质细胞缺失转录因子β-actin图2甲状旁腺细胞标志分子表达水平Figure2Levelsofsurfacemarkersofparathyroidcells图注：图A为hTERT基因表达电泳图；B为hTERT基因相对表达量。与正常对照组及空载病毒组比较，aP<0.05。图3hTERT基因转染后细胞中hTERT基因表达Figure3ExpressionofhTERTgeneinthehTERT-transfectedcells表2hTERT基因转染后细胞中hTERT基因和蛋白表达(x_±s，hTERT/β-actin)Tabl
鼠颈部分离切取甲状旁腺之后，病理学实验室诊断确认其为甲状旁腺；而后的细胞鉴定进一步证明了这一点。钙敏感性受体、甲状旁腺激素及神经胶质细胞缺失转录因子(GCM2)这3个分子是甲状旁腺细胞特征性的标志物，Westernblot阳性的检测结果表明提取的细胞确系甲状旁腺细胞[18-22]。实验转染hTERT后，基因转染组中细胞中的hTERT的基因和蛋白相对表达水平均显著升高，由此可知此图注：图A为hTERT蛋白表达电泳图；B为hTERT蛋白相对表达量。与正常对照组及空载病毒组比较，aP<0.05。图4hTERT基因转染后细胞中hTERT蛋白表达水平Figure4LevelofhTERTproteininthehTERT-transfectedcells表3甲状旁腺细胞的增殖活性(x_±s，n=3，A值)Table3Proliferationactivityofparathyroidcells时间正常对照组空载病毒组hTERT基因转染组24h0.11±0.020.12±0.050.19±0.0348h0.16±0.050.18±0.030.36±0.0472h0.20±0.040.22±0.020.50±0.04a96h0.25±0.060.28±0.030.69±0.05a120h0.29±0.050.32±0.020.80±0.06a表注：与正常对照组及空载病毒组比较，aP<0.05。24h48h72h96h120h1.000.750.500.250aaa正常对照组空载病毒组hTERT基因转染组A490nm图注：与正常对照组及空载病毒组比较，aP<0.05。图5各组细胞生长曲线Figure5Growthcurvesofthecells表4各组细胞周期分布情况(x_±s，n=3，%)Table4Cellcycledistribution周期分布正常对照组空载病毒组hTERT基因转染组G0/G1期42.13±1.4045.32±1.4925.13±1.55aG2/M期9.81±1.639
本文编号：3107849
【文章来源】：中国组织工程研究. 2019,23(25)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
甲状旁腺细胞标志分子表达水平Figure2Levelsofsurfacemarkersofparathyroidcellsβ-actin
赴??で?呒跋赴?鲋郴钚?与正常的甲状旁腺细胞和含有空载病毒的细胞相比，hTERT基因转染显著提高了甲状旁腺细胞的增殖活性，差异有显著性意义(P<0.05)，见表3。实验采用CCK-8法绘制了甲状旁腺细胞的生长曲线。hTERT基因转染组中甲状旁腺细胞的增殖活性在培养72h后显著快于正常对照组和空载病毒组中的细胞增殖速度，差异有显著性意义(P<0.05)，见图5。图注：图A为细胞培养当天；B为细胞培养2d；C为细胞培养3d。经过鉴定所培养细胞为甲状旁腺细胞的主细胞。图1大鼠甲状旁腺细胞的形态特点(×40)Figure1Morphologyofratparathyroidcells(×40)表1甲状旁腺细胞特异性标记物不同时间表达(x_±s，n=3)Table1Specialmarkersofparathyroidcellsatdifferenttime时间钙敏感性受体甲状旁腺激素神经胶质细胞缺失转录因子7d0.51±0.070.64±0.050.49±0.0614d1.18±0.12a1.10±0.10a1.23±0.11a21d1.66±0.14ab1.82±0.17ab1.79±0.18ab表注：与7d时比较，aP<0.05；与14d时比较，bP<0.05。7d14d21d钙敏感性受体甲状旁腺激素神经胶质细胞缺失转录因子β-actin图2甲状旁腺细胞标志分子表达水平Figure2Levelsofsurfacemarkersofparathyroidcells图注：图A为hTERT基因表达电泳图；B为hTERT基因相对表达量。与正常对照组及空载病毒组比较，aP<0.05。图3hTERT基因转染后细胞中hTERT基因表达Figure3ExpressionofhTERTgeneinthehTERT-transfectedcells表2hTERT基因转染后细胞中hTERT基因和蛋白表达(x_±s，hTERT/β-actin)Tabl
鼠颈部分离切取甲状旁腺之后，病理学实验室诊断确认其为甲状旁腺；而后的细胞鉴定进一步证明了这一点。钙敏感性受体、甲状旁腺激素及神经胶质细胞缺失转录因子(GCM2)这3个分子是甲状旁腺细胞特征性的标志物，Westernblot阳性的检测结果表明提取的细胞确系甲状旁腺细胞[18-22]。实验转染hTERT后，基因转染组中细胞中的hTERT的基因和蛋白相对表达水平均显著升高，由此可知此图注：图A为hTERT蛋白表达电泳图；B为hTERT蛋白相对表达量。与正常对照组及空载病毒组比较，aP<0.05。图4hTERT基因转染后细胞中hTERT蛋白表达水平Figure4LevelofhTERTproteininthehTERT-transfectedcells表3甲状旁腺细胞的增殖活性(x_±s，n=3，A值)Table3Proliferationactivityofparathyroidcells时间正常对照组空载病毒组hTERT基因转染组24h0.11±0.020.12±0.050.19±0.0348h0.16±0.050.18±0.030.36±0.0472h0.20±0.040.22±0.020.50±0.04a96h0.25±0.060.28±0.030.69±0.05a120h0.29±0.050.32±0.020.80±0.06a表注：与正常对照组及空载病毒组比较，aP<0.05。24h48h72h96h120h1.000.750.500.250aaa正常对照组空载病毒组hTERT基因转染组A490nm图注：与正常对照组及空载病毒组比较，aP<0.05。图5各组细胞生长曲线Figure5Growthcurvesofthecells表4各组细胞周期分布情况(x_±s，n=3，%)Table4Cellcycledistribution周期分布正常对照组空载病毒组hTERT基因转染组G0/G1期42.13±1.4045.32±1.4925.13±1.55aG2/M期9.81±1.639
本文编号：3107849
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