大鼠抗汉滩病毒单抗可变区基因的克

发布时间：2021-04-02 11:19

　　用异硫氰酸胍抽提抗汉滩病毒单克隆抗体大鼠杂交瘤细胞株KF12的总RNA，用逆转录酶合成第一链cDNA，用PCR技术扩增出360bp的重链变区基因（V_H）和351bp轻链变区基因（V_L），分别克隆至pUCV_NP-PCR和pWR13载体上，经筛选和DNA序列分析研究，证实已获得了该单克隆抗体的可变区基因。 通过一系列重组，将PCR扩增的抗汉滩病毒单抗的重链变区基因（360bp），克隆至能在真核细胞中进行表达的载体中得pTZVHBⅡ，然后再与免疫球蛋白重链增强子克隆得pSV-VE质粒，最终和pSVΔHgptHur 3质粒重组，经酶谱分析及Southern blot，挑得一连接方向正确的可表达人—鼠嵌合抗体的嵌合质粒pSVΔHgptRatKF12 VHHur3。通过电脉冲介导基因 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：114 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

PCR扩增的可变区基因电泳分析

与分子量标准比较其DNA片段大小约4。。bp，与推测抗体重因大小相近(见图1)。用VK一BACK和VK一OFR一对引物从杂交瘤细胞扩增此大鼠单抗轻链可变区基因，扩增产物经2%琼脂糖凝胶电可见一条明显扩增带，与分子量标准比较，DNA片段分子大小约抗体轻链可变区大小相符，推测为此抗体轻链可变区基因扩增二、大鼠单抗VH、V毛基因的克隆和序列测定正向引物第二次加样AC、GT第一次加样ACGT反向引物第二次加样第一次加样ACGTACGT

。RI，P。tI双酶切，5个克隆提取的质粒DNA切出了约400bp大小的片段，随机选择3个提取含vL基因片段的pwR，:Ra七KF12vH质粒DNA，进行DNA序列反应，放射自显影结果(见图4)，读片记录所测Lv基因序列(见图5)，所得VL序列输人计算机分析，发现此基因为一新基因，基因库中无相同基因。


本文编号：3115180