应用改进的AdEasy系统制备KDR启动子驱动下的双自杀基因重组腺病毒

发布时间：2021-04-02 14:46

　　目的 建立一种改进的AdEasy系统应用于复制缺陷型腺病毒的构建，针对传统的细菌内同源重组法制备腺病毒过程仍较复杂，成功率低和对实验室条件要求高等缺点，通过先构建AdEasier-1细菌后进行细菌内同源重组来简化实验过程，缩短实验周期，提高成功率，降低对实验室条件的要求，以利于在更多实验室应用。并利用这一系统构建KDR启动子驱动下的同时含大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（CD）基因和Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）基因的融合基因重组腺病毒载体，应用于大肠癌的抗血管生成治疗。利用KDR启动子对肿瘤新生血管内皮细胞的靶向作用，驱动CD/5-FC和HSV-TK/GCV两套自杀基因系统特异性杀伤肿瘤新生血管内皮细胞，为进一步开展肿瘤血管的靶向治疗研究奠定基础。 方法 1、改进的AdEasy系统的建立 应用氯化钙法将腺病毒骨架质粒AdEasey-1转化于BJ5183菌，所得阳性克隆即为AdEasier-1细菌，pAdtrack经酶切线性化后，转化用氯化钙制备的感受态AdEasier-1细菌，获得重组腺病毒质粒。最后将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞包装获得重组腺病毒。通过... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

经3次293细胞内的扩增，并经cscl梯度离心后，病毒滴度为Zxlo，’pfil八nl

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【参考文献】：
期刊论文
[1]血管内皮生长因子及其受体在人大肠癌组织中的分布、定量和意义[J]. 陈治,王晓莉,张莉,黄宗海,潘玉先,曹长安.  世界华人消化杂志. 2000(04)



本文编号：3115455