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人巨细胞病毒pp150基因的原核表达及抗原性分析

发布时间:2021-04-04 22:30
  ①目的 构建人巨细胞病毒 (HCMV) pp15 0的原核高效表达系统 ,制备用于急性、活动性HCMV感染血清学诊断的基因工程抗原。②方法 PCR扩增HCMVpp15 0抗原决定簇 (84 0~ 10 4 8aa)编码基因片段 ,分别插入原核表达载体 pMAL p2、pET 2 8a ,转化宿主菌E .coli.诱导表达 ,经麦芽糖亲和层析树脂纯化 ,以Western Blot及间接ELISA法鉴定其抗原性。③结果 重组表达质粒 pMAL p2 pp15 0可在E .coli.DH5α中有效表达 ,表达产物经SDS PAGE电泳后 ,凝胶成像系统分析显示相对分子质量约为 6 .4万 ,约占菌体蛋白的 10 %。而重组质粒pET 2 8a pp15 0未见明显表达带。Western Blot检测 ,阳性识别率为 80 % (12 / 15 )。用此蛋白包被ELISA板 ,检测正常孕妇血清 ,阳性率为 6 .5 % (17/ 2 6 3)。与本室制备的全病毒抗原ELISA的诊断符合率为 96 %。④结论此重组蛋白具有良好的抗原性 ,进一步完善后可用于HCMV急性和活动性感染的诊断。 

【文章来源】:青岛大学医学院学报. 2003,(01)

【文章页数】:4 页

【部分图文】:

人巨细胞病毒pp150基因的原核表达及抗原性分析


重组质粒pET-28a-pp150和pMAL-p2-pp150酶切鉴定

临床症状图,表达蛋白,病毒抗原,阴性


IgM阴性血清均为阴性,表明此融合蛋白识别IgM特异性抗体的识别率为80%。阳性血清与MBP无反应。见图3。用纯化重组蛋白包被ELISA板,检测正常孕妇血清标本263份,其中17份阳性,与本室制备的全病毒抗原ELISA检测试剂盒检测结果比较,诊断符合率为96%。见表1。图3 表达蛋白的Western印迹分析①蛋白质相对分子质量标准,②重组体表达产物,③MBP对照表1 重组抗原与全病毒抗原ELISA法检测结果比较(份)方法重组抗原ELISA法阳性阴性合计全病毒抗原阳性10 3 13ELISA法阴性7 243 250 合计17 246 2633 讨  论人巨细胞病毒感染极为常见,一般不表现临床症状

【参考文献】:
期刊论文
[1]人巨细胞病毒重组抗原在酶联免疫吸附试验中的应用研究[J]. 阮强,郭津津,赵玉坤,刘兰青,吕绳敏,史金阳,刘庆.  中国医科大学学报. 1999(03)



本文编号:3118605

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