利用CRISPR/Cas9系统构建人HPRT1基因定点突变细胞株

发布时间：2021-04-05 21:12

　　Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase1 （HPRT1）基因突变会导致次黄嘌呤和鸟嘌呤代谢异常,严重的代谢障碍被称为Lesch-Nyhan综合征,表现为智力低下,行为上出现强迫性自我毁伤,并伴随痛风或肾结石等症状。HPRT1基因具有多种突变模式,近年来对其突变谱的研究表明该基因具有一些"突变热点"。本研究选取了导致翻译提前终止的热点突变c.508C>T突变和c.151C>T突变,在HEK293T和HeLa细胞中,以单链寡核苷酸（single-stranded oligo-deoxyribonucleotides, ssODN）作为同源重组模板,利用CRISPR/Cas9技术构建了这两种突变的单克隆细胞株,发生定点突变的效率分别为16.3%和10%。进一步通过Westernblot检测点突变的单克隆细胞的HPRT1蛋白表达水平,通过6-TG毒性实验检测点突变的单克隆细胞的次黄嘌呤/鸟嘌呤磷酸核糖转移酶活性,结果表明纯合突变的单细胞克隆不能正常表达HPRT1蛋白,其次黄嘌呤/鸟嘌呤磷酸核糖转移酶活性丧失;杂合突变的单细胞克隆... 

【文章来源】：遗传. 2019,41(10)北大核心CSCD

【文章页数】：11 页

【部分图文】：

孔板时收集含有靶位点的识别序列

【参考文献】：
期刊论文
[1]无义突变与“遗传补偿效应”[J]. 马志鹏,陈军.  遗传. 2019(05)



本文编号：3120110