人类DNA损伤修复基因hR24L的克隆和功能研究

发布时间：2021-04-08 09:22

　　目的：克隆人类DNA损伤修复基因hR24L，构建其正义和反义表达载体重组体，为该基因的结构和功能研究奠定实验基础；用外源性hR24L基因转染哺乳动物细胞，得到稳定遗传的细胞系。观察转染细胞增殖速度的变化，检测细胞周期，了解外源性hR24L基因转染对哺乳动物细胞周期的影响，研究其作用机制；观察正义和反义hR24L基因转染对细胞凋亡的影响，了解修复基因与细胞凋亡的关系，为肿瘤的基因诊断和基因治疗（特别是反义核酸）的研究积累资料；研究电离辐射对哺乳动物细胞内源性hR24L表达的影响，了解其作用特点。 方法：首先用PCR方法扩增hR24L的开放阅读框（ORF），克隆入pGEM-T载体，经酶切鉴定和测序无突变后，重组到逆转录病毒表达载体（pDor-neo）中，得到正义和反义重组体（pDor-hR24Ls和pDor-hR24La）。然后用重组质粒和空载体分别转染MCF7细胞，筛选出阳性克隆，得到稳定遗传的细胞系，并用Southern印迹杂交证实外源性hR24L已成功整合到细胞基一2-因组中。观察细胞生长速度，与空载体转染细胞相比较。用Northern印迹杂交检测靶细胞hR24LmRNA的表达... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
正文
小结
综述
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]hR24L基因转染对MCF7细胞周期的影响[J]. 李平法,梁东良,杨锦南,张文,朱应葆.  新乡医学院学报. 2002(04)
[2]hR24L基因转染对MCF7细胞凋亡的影响[J]. 李平法,朱应葆,韩云,童坦君,傅欣.  基础医学与临床. 2001(04)
[3]电离辐射对人乳腺癌MCF7细胞系hR24L基因表达的影响[J]. 李平法,朱应葆,韩云,贾廷珍,童坦君.  癌变.畸变.突变. 2001(02)
[4]人类DNA修复蛋白hR24Lp具有转录激活作用[J]. 李平法,傅欣,梁崇凤,朱应葆,童坦君.  北京医科大学学报. 2000(02)
[5]人类hR24L基因参与DNA切除修复和重组修复的研究[J]. 韩云,朱应葆.  中华医学杂志. 1999(12)
[6]人DNA修复基因hR24L参与细胞周期检定点调控[J]. 朱应葆,韩云.  北京医科大学学报. 1999(03)
[7]紫外线照射对DNA修复基因RAD24转录的影响[J]. 朱应葆,韩云,傅欣,童坦君,贾廷珍.  北京医科大学学报. 1998(02)



本文编号：3125295