钩端螺旋体溶血素基因的克隆表达及功能的初步研究

发布时间：2021-04-08 14:40

　　钩段螺旋体病是一种广泛流行的人畜共患疾病，它是由病原钩端螺旋体所引起的。感染后引起人的急性发热和全身组织病理改变，严重者甚至危及生命。在钩端螺旋体病的早期可以看到血管上皮的损伤，多种器官组织上普遍出现出血点，晚期则出现肝细胞坏死、黄疸及全身衰竭。 本论文首先以钩端螺旋体黄疸出血型赖株（Leptospira interrogans serogroup Icterohaemorrhagiae serovar lai type strain #56601）的基因组DNA为模板，通过PCR的方法获得了8种溶血素蛋白（LA1029、LA4004、LA0327、LA3937、LA0378、LA1650、LA3050和LA1027）的基因。然后构建了这8个基因的表达型重组质粒，并在大肠杆菌中成功地表达了这8种溶血素的融合蛋白以及对这8种重组蛋白进行了溶血活性的研究。 实验结果表明这8种溶血素重组蛋白，都能在血平板上产生溶血斑，说明它们都具有溶血活性。其中LA1029，LA1027，LA4004和LA3050这四种蛋白都具有鞘磷脂酶的活性，能水解鞘磷脂生成神经酰胺。 此外，本论文还考... 

【文章来源】：沈阳药科大学辽宁省

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

重组溶血素的纯化

钓端螺旋体重组溶血素溶血活性检测.

带有pET2b8空载体的大肠杆菌超声上清液为空白对照，以鞘磷脂酶C(SphC，51脚aCo.)为阳性对照。取反应的有机层1sul点板，进行薄层层析，实验结果见图2一2SPH1234565471sPhC，2LA10293LA40044Pet28bssPh6LA10277LA3050CeeermideSPHsPhingomyelin图2一2TLC法检测钩端螺旋体鞘磷脂酶类溶血素酶活性Fig.2一2TLCdetectionhtesPhingomyelinaseactlvytiofLePtosPiarinte口09田招Pshigomyelinase一likehemolysins4个鞘磷脂酶类溶血素都有不同程度上的水解鞘磷脂能力。其中AL1029的水解能力最强，底物鞘磷脂都被水解，与鞘磷脂酶阳性对照的水解能力相当。AL4004和LA1027也有鞘磷脂酶的水解能力，但是活性比LAIO29弱。LA3050的鞘磷脂酶能力最弱，37

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3125745