戊型肝炎病毒结构区ORF2基因的克隆与表达

发布时间：2021-04-08 19:29

　　戊型肝炎作为一种经粪-口途径传播的急性传染病，主要流行于亚洲、非洲、中美洲等发展中国家和地区。其病毒基因组是单股线状正链RNA，长约7.5kb，由5′非编码区、编码区和3′非编码区组成，编码区包括三个开放读码框架（ORFs）。其中结构基因ORF2位于基因组的3′端，长1980bp，编码病毒的结构蛋白。本实验采用戊型肝炎病毒（HEV）新疆流行株（CH1.1）ORF2区3′端cDNA片段492bp，插入到融合蛋白表达载体pGEX-4T-3，转化至大肠杆菌TG-1进行表达，以获得的GST-HEV融合蛋白作为抗原，应用于酶免疫检测（EIA）中。一、HEV目的基因的扩增 采用RT-nPCR法，扩增HEV ORF2区的核苷酸序列，目标长度为492bp，称为HEV ORF2 cDNA。二、目的基因与融合蛋白表达载体pGEX-4T-3重组体的构建 BamHI/EcoRI双酶切PCR扩增产物和pGEX-4T-3质粒，T₄连接酶连接酶切产物，转化至感受态细胞TG-1，碱裂解法提取质粒DNA。经酶切、PCR鉴定，1％琼脂糖凝胶电泳，紫外检测仪下均可见约500bp阳性条带，从... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：41 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
一、 中文摘要
二、 英文摘要
三、 论文正文
    戊型肝炎病毒结构区ORF2基因的克隆与表达
四、 综述
    基因重组表达戊型肝炎病毒的研究进展
五、 译文
    戊型肝炎的研究现状
六、 致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]戊型肝炎病毒结构区基因在大肠杆菌中的表达及其在诊断中的应用[J]. 毕胜利,江永珍,赵洪兰,李景元,鲁健,曹经瑗,刘崇柏.  病毒学报. 1996(02)
[2]戊肝病毒活性肽的选择、合成与应用[J]. 戚中田,潘卫,崔大敷,俞超,崔恒冉.  中国病毒学. 1995(04)
[3]戊型肝炎病毒中国XT-179株全基因组cDNA克隆及其核苷酸和氨基酸序列分析[J]. 马学众,曹学义,内田俟和,Thin Thin Aye,志方俊夫.  中国病毒学. 1993(04)
[4]我国戊型肝炎病毒结构区基因组的序列分析[J]. 庄辉,李凡,郭晓霞,马学众,艾婷婷,内田俊和,志方俊夫.  中华实验和临床病毒学杂志. 1993 (01)



本文编号：3126123