C-端序列分析方法学研究与HWAP-Ⅰ生物活性方面的研究

发布时间：2021-04-09 09:04

　　蛋白质序列分析是蛋白质研究中的核心技术。N端测序已经成为十分完善的技术，并已经实现了自动化。C端与N端一样，在蛋白质分子结构分析中具有重要地位，不仅对N端封闭的蛋白质进行序列测定，而且对基因克隆具有指导意义。尽管Schlack-Kumpf降解法的研究进展缓慢，但是近十年研究表明该方法是很有希望成为C端顺序测定的常规方法。 在蛋白质C端（异）硫氰酸法顺序测定技术中，标准氨基酸乙内酰硫脲（TH-AA）的制备是必须首先要解决的问题。本文以L-型氨基酸为原料，采用乙酸酐做活化试剂，TBS-ITC为偶联试剂，制备了20种TH-AA，反应产物通过RP-HELC进行了分离纯化。 本文同时在偶联试剂方面进行了探索，采用合成的13肽（NH₂-KKESDFLMFVYLV-COOH）为模型肽，并偶联到DITC玻璃珠上进行了方法学研究。通过实验条件的优化对C-端序列分析的化学方法进行了微量化探索，在0.5nmol规模可获得三个氨基酸C-端序列信号。改变偶联试剂的浓度发现在0.2mol／L可获得最佳的偶联效果。同时应用两种偶联试剂TBS-ITC和TPGe-ITC进行了C-端序列... 

【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
缩写表（中英文对照）
中文摘要
英文摘要
第一部分 C-端序列分析的方法学研究
    第一章 前言
    第二章 标准氨基酸乙内酰硫脲的制备
    第三章 合成用于方法学研究的模型肽
    第四章 两种偶联试剂序列分析的比较
    第五章 进一步研究设想
第二部分 有关虎纹镇痛肽的性质研究
    第一章 HWAP-Ⅰ活性单位测定
    第二章 HWAP-Ⅰ的稳定性实验
参考文献
致谢
原创性声明


【参考文献】：
期刊论文
[1]利用飞行时间质谱进行蛋白质和多肽C端序列测定[J]. 陈平,梁宋平.  湖南师范大学自然科学学报. 2001(01)
[2]蛋白质C端（异）硫氰酸法序列测定反应机理及进展[J]. 莫碧兰,李江,梁宋平.  生物化学与生物物理进展. 1999(03)
[3]质谱离子化技术及其发展[J]. 李悦,王慧敏.  中国医药工业杂志. 1998(11)
[4]蛋白质及多肽的C端分析[J]. 曾嵘,徐来根,夏其昌.  生物化学与生物物理学报. 1998(05)
[5]一种用于蛋白质C端序列测定的脯氨酸乙内酰硫脲（TH-Pro）新制备方法[J]. 莫碧兰,李江,梁宋平.  中国生物化学与分子生物学报. 1998(02)
[6]蛋白质和多肽 C 端氨基酸序列研究进展[J]. 屠红旻,夏其昌.  生物化学与生物物理进展. 1993(03)



本文编号：3127339