高保真DNA聚合酶介导的复合分子“开/关”技术平台在Y染色体识别中的应用

发布时间：2021-04-14 05:55

　　目的：研究SNP敏感性纳米级复合分子开关在Y染色体识别中的应用。 方法：选择性别表型正常者为研究对象，肘正中静脉采血5ml，加0.5ml肝素抗凝，-20℃保存备用。采用酚／氯仿法提取基因组DNA，0.8％琼脂糖凝胶电泳鉴定，紫外分光光度仪测定OD260／280值，分管保存备用。根据Y染色体基因序列及SNP信息，设计引物。实验分四步骤进行。首先采用X染色体特异性引物X1、Y染色体特异性引物Y02和Y染色体常染色体同源区引物Y2进行普通PCR对已知性别的样本进行检测，比较Taq酶与Pfu酶实验结果的差异；其次用实时定量PCR和分子开关，Y染色体特异性引物Y02和Y染色体常染色体同源区引物Y2，对已知性别的样本进行检测；第三用普通PCR，Y染色体M45（rs2032631）、M89（rs2032652）、M172（rs2032604）SNP位点引物，对已知性别的样本进行检测，比较Taq酶与Pfu酶实验结果的差异；最后用反向巢式PCR对Y染色体M45（rs2032631）、M89（rs2032652）、M172（rs2032604）SNP位点进行检测，比较Taq酶与Pfu酶实验结果的差异... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：43 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Taq酶介导的引物延伸反应电泳图

小于女性DNA样本，阴性对照未见指数扩增曲线;使用引物Y02的引物延伸反应中，只有男性DNA样本指数扩增曲线，女性DNA样本和阴性对照未见指数扩增曲线(图3，4，5，6)。图3引物Y2实时PCR扩增曲线图

引物Y2实时PcR产物熔点曲线图


本文编号：3136796