抗融合标签单克隆抗体的制备、鉴定与应用研究

发布时间：2021-04-19 09:14

　　融合蛋白（fusion protein）是将两个或两个以上的基因通过一定方式连接在一起共同表达出的重组蛋白。标签融合蛋白（tag fusion protein）是融合蛋白的一种，它是由目的蛋白（target protein）和融合标签（fusion tag）共同构成的蛋白嵌合体。常见的融合标签包括：多聚组氨酸（poly-His）、FLAG多肽、葡萄球菌蛋白A（SPA）、免疫球蛋白的Fc段以及谷胱甘肽转移酶（GST）等。融合标签的使用不仅方便了目的蛋白的表达和纯化，同时为目的蛋白结构和功能的研究提供了便利手段。随着人类基因组计划（Human Genome Project，HGP）的完成，后基因组学（post-genomics）和蛋白质组学（proteomics）已经成为生命科学发展的重点，这一时期，科学家面临的最大挑战是在整体水平上系统地、综合地研究蛋白质的结构、功能以及蛋白质与蛋白质、核酸等生物大分子之间的相互作用。蛋白质的表达和纯化是蛋白质研究的关键环节。与标签蛋白融合表达提供了一个高通量（high-through）表达和筛选功能蛋白的平台，因而为学者广泛重视，已成为一条联系基因组和... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

融蛋白克隆载体及其克隆外源基因的

入△22有2个，入△23有3个。这就使外源基因插入到EcoRI位点后，会形成三种全部可能的相对lacZ基因转译起点的读码结构，而其中必定有一种是正确的(图4)。诊月月翻尸门门o}}二。，】4八酬，二牛书1以厅朽c邢l巴—-一肠“峨r如‘2、.亩一I丫0-门厂节门广”纽”拍“倪l基.卫如‘I.}{。〔_!=书】.讲升~订^^l}。图3融蛋白克隆载体及其克隆外源基因的图4以Lacz为靶基因的融合载体组示意图合Omp:大肠杆菌胞膜蛋白Omp基因片段LacZ:日一半乳糖普酶基因(3)通过相互匹配的寡核昔酸(dA一dT或dC一dG)的延伸进行连接，由于寡核昔酸延伸的数目长短不一，这样自然可以形成三种读框的重组体(图5)。例如，1978年LVina-Komaro任等利用这种策略克隆并表达了大鼠的前胰岛素原。他们将大鼠前胰岛素原mRNA反转录成eDNA，然后用末端转

大利亚科学家Wilkins等首先提出的〔35〕，是指一个细胞部蛋白质成分。对蛋白质组进行系统研究的科学称为omi。s)。随着后基因组时代的到来，蛋白质组学越来越受切关注。我国国家自然基金委员会己经把蛋白组学的研目。组学的研究的主要范畴包括:蛋白质的分离与鉴定、蛋究以及蛋白质结构生物学的研究。融合标签在这些领域。)应用于蛋白质的分离和鉴定研究表明，在细胞中大多合物来发挥作用的，分离并鉴定这些蛋白复合物中的组究具有重大意义。通过建立多亲和纯化标签(multipleafationtag，MAFTtag)或串联亲和纯化标签(TAP)人们体系中纯化出所需的蛋白质复合物，然后再通过电泳、质复合物的详细组成〔27.35，(图6)。除TAP以外，单一标和纯化蛋白质复合物。例如LonPhan等，利用His6融合rtlP成功地分离并鉴定了在酵母和哺乳动物中高度保守的eIF3核心复合物(e正3一eoreeo卿lex)。.p.p针0.

【参考文献】：
期刊论文
[1]CD/Ig融合蛋白研究及应用概况[J]. 孙凯,冯琦,金伯泉.  中华内科杂志. 2000(06)



本文编号：3147269