大肠埃希菌外膜囊泡作为新型外源质粒递送载体的研究

发布时间：2021-04-20 04:07

　　目的探讨大肠埃希菌外膜囊泡（outer membrane vesicles,OMVs）作为新型DNA疫苗递送载体的潜力及价值。方法从大肠埃希菌DH5α的培养上清中经过滤、超滤、超速离心等步骤收集天然分泌的OMVs,采用密度梯度离心法纯化OMVs。将纯化后的OMVs与哺乳动物吞噬细胞及非吞噬细胞进行体外孵育,观察不同细胞对OMVs的摄取效率。通过电击转化方式将带绿色荧光蛋白的真核表达质粒pIRES2-EGFP转入OMVs中,并与RAW264. 7细胞共孵育,观察OMVs携带真核表达质粒进入细胞并表达绿色荧光蛋白的情况。结果密度梯度离心法可有效纯化OMVs,纯化后的OMVs进入不同哺乳动物细胞的效率不同,进入吞噬细胞的效率高于非吞噬细胞,经电击转化后,质粒DNA可被导入OMVs中,并随吞噬细胞摄取及表达。结论约5 300 bp的真核表达质粒可用电击方式导入OMVs中,并通过OMVs介导该质粒在吞噬细胞中表达,提示OMVs具有作为新型质粒DNA递送载体的潜力。 

【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2019,32(01)CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株、细胞及质粒
    1.2 主要试剂及仪器
    1.3大肠埃希菌DH5α分泌OMVs的收集
    1.4 OMVs的纯化
    1.5 OMVs的透射电镜观察
    1.6 哺乳动物细胞对OMVs的摄取情况分析
    1.7 OMVs介导的外源质粒在吞噬细胞中表达的检测
2 结果
    2.1 大肠埃希菌DH5α分泌OMVs的鉴定
        2.1.1 透射电镜观察
        2.1.2 SDS-PAGE分析
    2.2 纯化OMVs的鉴定
        2.2.1 SDS-PAGE分析
        2.2.2 透射电镜观察
    2.3 哺乳动物细胞对OMVs的摄取情况
    2.4 OMVs介导的外源质粒在吞噬细胞中的表达
3 讨论



本文编号：3148946