前纤维蛋白多克隆抗体对刚地弓形虫在小鼠胚胎成纤维细胞中增殖的影响

发布时间：2021-04-20 22:24

　　目的制备抗刚地弓形虫前纤维蛋白（Tg PRF）的多克隆抗体,初步研究其对刚地弓形虫在小鼠胚胎成纤维细胞中增殖的影响。方法提取刚地弓形虫RH株RNA、扩增Tg PRF基因,并构建pET-30a （+）-Tg PRF重组质粒,将其转化至大肠埃希菌BL21 （DE3）感受态细胞,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定蛋白表达情况。目的蛋白经AKTA系统进行亲和层析纯化和超滤浓缩后进行蛋白质印迹分析（Western blotting）。将2 mg纯化的重组蛋白Tg PRF与等体积弗氏完全佐剂混合乳化后,背部皮下多点注射免疫新西兰兔2只,首次免疫后每隔2周,用1 mg纯化的重组蛋白Tg PRF与等体积弗氏不完全佐剂加强免疫3次,末次免疫后10 d心脏采血。免疫后血清进行Western blotting鉴定及ELISA抗体效价检测。将胚胎成纤维细胞接种于96孔板中（4×10³个细胞/孔）,并加入10⁴个刚地弓形虫速殖子（RH-GFP）。设空白对照组（A组）,抗体干预组（B1、 B2和... 

【文章来源】：中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2019,37(04)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 质粒、菌株、动物和虫种来源
    1.2 主要试剂
    1.3 重组质粒pET-30a（+）-Tg PRF的构建
    1.4 Tg PRF蛋白在E.coli BL21（DE3）中的表达及鉴定
    1.5 Tg PRF蛋白的多克隆抗体制备和效价、毒性检测
    1.6 Tg PRF多克隆抗体对弓形虫速殖子体外增殖的影响
    1.7 统计学分析
    1.8 伦理批准和患者知情同意
2 结果
    2.1 Tg PRF基因的扩增和重组质粒pET-30a（+）-Tg PRF的构建
    2.2 重组质粒在BL21（DE3）中的表达及鉴定
    2.3 Tg PRF多克隆抗体鉴定及毒性、效价检测
    2.4 Tg PRF多克隆抗体对弓形虫速殖子体外增殖的影响
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]刚地弓形虫在我国男性人群的流行及其与男性生殖障碍关系的Meta分析[J]. 杨瑞,李佩珍,岳续朋,夏嫱,杜联峰,卢彦欣,廖业,郭锦锦.  中国人兽共患病学报. 2016(09)
[2]刚地弓形虫自噬相关蛋白3基因的克隆表达与多抗制备[J]. 华倩倩,李相志,万玉静,陈弟,赵徐寒晖,蒋凯,胡昕,潘长旺,谭峰.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2014(06)



本文编号：3150519