基于报告基因的抗HER2单克隆抗体ADCC生物学活性测定方法的建立及应用

发布时间：2021-04-21 05:27

　　目的:利用转基因细胞法建立抗人表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor 2,HER2）单抗的抗体依赖细胞介导的细胞毒作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC）生物学活性检测方法。方法:利用Jurkat-hFcγRⅢa-NFAT转基因细胞系作为效应细胞,SKBR3细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统（BioGloTM Luciferase Assay system）进行抗HER2单抗的ADCC生物学活性检测,同时对试验条件进行优化及方法学验证,并将该检测方法用于不同类型的抗HER2单抗ADCC效应的评价。结果:抗HER2单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程式:y=（A-D）/[1+（x/C）^B]+D,方法经优化后确定靶细胞为SKBR3细胞,抗体稀释起始工作质量浓度为4 000 ng·mL^-1,1∶4倍的稀释倍数,效靶比为15∶1,诱导时间为20 h。该方法具有良好的专属性;3次独立检测的板间、日间最大诱导倍数（fo... 

【文章来源】：药物分析杂志. 2019,39(01)北大核心CSCD

【文章页数】：11 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要仪器
    1.2 材料
    1.3 方法
        1.3.1 Jurkat-hFcγRⅢa-NFAT细胞株的构建
            1.3.1. 1 质粒转染效应细胞株
            1.3.1. 2 效应细胞株的筛选
        1.3.2 ADCC生物学活性测定
        1.3.3 试验条件的优化
            1.3.3. 1 靶细胞的选择
                1.3.3. 1. 1 流式细胞术检测不同靶细胞表面HER2表达量
                1.3.3. 1. 2 不同HER2+靶细胞的免疫荧光检测
                1.3.3. 1. 3 不同HER2+靶细胞的ADCC活性测定
            1.3.3. 2 抗体浓度范围的选择
            1.3.3. 3 效靶比的选择
            1.3.3. 4 诱导时间的选择
        1.3.4 方法学验证
            1.3.4. 1 专属性试验
                1.3.4. 1. 1 靶细胞专属性
                1.3.4. 1. 2 效应细胞专属性
                1.3.4. 1. 3 抗体专属性
            1.3.4. 2 精密性试验
            1.3.4. 3 准确性试验
        1.3.5 方法应用
            1.3.5. 1 检测不同类型的抗HER2单抗的ADCC活性
            1.3.5. 2 检测不同变性程度的抗HER2单抗的ADCC活性
                1.3.5. 2. 1 酶切变性试验
                1.3.5. 2. 2 热稳定性试验
2 结果
    2.1 Jurkat-hFcγRⅢa-NFAT细胞株的构建
    2.2 抗HER2单抗的ADCC剂量效应曲线
    2.3 ADCC试验条件的优化
        2.3.1 靶细胞的选择
            2.3.1. 1 流式细胞术检测不同靶细胞表面HER2表达量
            2.3.1. 2 不同HER2 （+） 靶细胞的免疫荧光检测
            2.3.1. 3 不同HER2+靶细胞的ADCC测定
        2.3.2 抗体浓度范围的选择
        2.3.3 效靶比的选择
        2.3.4 诱导时间的选择
    2.4 方法学验证
        2.4.1 专属性
        2.4.2 精密性
        2.4.3 准确性
    2.5 方法应用
        2.5.1 对HER2靶点的不同类型单克隆抗体类药物的ADCC活性比较
        2.5.2 对HER2靶点的不同变性程度的单克隆抗体药物的ADCC活性比较
            2.5.2. 1 酶切变性
            2.5.2. 2 热稳定性试验
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]针对HER2靶点的抗体药物研究与肿瘤靶向治疗[J]. 汤沁,丁倩,林莉,张珍珍,代争,詹金彪.  药学学报. 2012(10)
[2]乳腺癌HER2基因的研究进展及其靶点治疗[J]. 乔杉杉,王大业.  首都医科大学学报. 2008(01)



本文编号：3151147