丙咪嗪经酸性鞘磷脂酶/神经酰胺通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NLRP3炎症小体的激活

发布时间：2021-04-25 06:47

　　目的研究丙咪嗪对脂多糖（LPS）诱导的小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）NLRP3炎症小体激活的影响并探讨其可能的作用机制。方法 CCK-8检测丙咪嗪对RAW264.7细胞活性的影响;用不同浓度丙咪嗪预先处理RAW264.7细胞2 h后再用LPS处理细胞8 h,Western blot法检测酸性鞘磷脂酶（ASM）、NLRP3、caspase-1、白细胞介素（IL）-1β和IL-18的蛋白表达水平;细胞免疫荧光法检测神经酰胺（Cer）的含量变化;ELISA法检测炎性因子IL-1β和IL-18的释放水平。结果与对照组相比,LPS（1 mg/L）能增加RAW264.7细胞ASM的蛋白表达和Cer的含量（P<0.01）;上调细胞中NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18的蛋白表达水平以及细胞上清液IL-1β和IL-18的释放水平（P<0.01）。而经丙咪嗪预先处理能够显著抑制LPS所致ASM和Cer的改变（P<0.01）;可明显抑制细胞中NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18的蛋白表达以及细胞上清液中IL-1β和IL-18的释放（P<0.... 

【文章来源】：安徽医科大学学报. 2019,54(07)北大核心

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 细胞
        1.1.2 主要药品与试剂
        1.1.3 仪器
    1.2 方法
        1.2.1 细胞培养、炎症模型的构建
        1.2.2 CCK-8法检测细胞活性
        1.2.3 Western blot法检测ASM、NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18的蛋白表达
        1.2.4 ELISA法测定RAW264.7细胞上清液中IL-1β和IL-18含量
        1.2.5 免疫荧光技术检测Cer表达
    1.3 统计学处理
2 结果
    2.1 丙咪嗪对RAW264.7细胞活性的影响
    2.2 丙咪嗪对LPS诱导的RAW264.7细胞中NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达的影响
    2.3 丙咪嗪对LPS诱导的RAW264.7细胞释放IL-1β和IL-18的影响
    2.4 丙咪嗪对LPS诱导的RAW264.7细胞中ASM蛋白表达和Cer含量的影响
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-22靶向抑制NLRP3基因对冠心病内皮细胞炎症损伤的保护作用[J]. 胡波,张晓刚,李德才.  安徽医科大学学报. 2018(05)



本文编号：3158912