纳尔逊海湾病毒S3蛋白纯化及大鼠多克隆抗体制备

发布时间：2021-05-09 16:27

　　目的制备纳尔逊海湾病毒（NBV）S3多克隆抗体。方法首先将构建好的Pris20His20MB-S3重组基因质粒,转化到大肠杆菌（E.coil）BL21（DE3）感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白表达。镍柱亲和层析法纯化目的蛋白以获得大量融合重组蛋白,以此为抗原免疫大鼠制备抗S3多克隆抗体并进行鉴定。结果20Pris20His20MB-S3蛋白的相对分子质量（M_r）约3920000,以包涵体形式存在,通过免疫大鼠成功制备出NBV20S3多克隆抗体。间接ELISA测定抗体效价达1∶6420000。间接免疫荧光实验证明S3蛋白成功在细胞内表达并以颗粒状分布在细胞质内。结论成功获得高反应性和高特异性的S3蛋白多克隆抗体。 

【文章来源】：细胞与分子免疫学杂志. 2019,35(05)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 Pris His MB-S3 融合蛋白在大肠杆菌中的表达
        1.2.2 Pris His MB-S3融合蛋白的纯化
        1.2.3 Western blot法鉴定纯化的目的蛋白
        1.2.4 Pris His MB-S3融合蛋白多克隆抗体制备
        1.2.5 多克隆抗体的Western blot法鉴定
        1.2.6 间接ELISA测定抗体效价
        1.2.7 间接免疫荧光技术 (indirect immunoinfluscent assay, IFA) 检测抗体对HEK293细胞病毒抗原的识别特异性
        1.2.8 IFA检测S3基因转染HEK293细胞S3蛋白的表达
2结果
    2.1 Pris His MB-S3 融合蛋白的诱导表达
    2.2 Pris His MB-S3融合蛋白的纯化
    2.3 Western blot法检测纯化的目的蛋白
    2.4 多克隆抗体抗性的检测
    2.5 ELISA测定抗体效价为1∶64 000
    2.6 制备的抗体特异性识别感染病毒的HEK293细胞S3蛋白
    2.7 制备的抗体能检测出HEK293细胞表达的S3融合蛋白
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]抗非洲马瘟VP7蛋白的小鼠单克隆抗体制备及其鉴定[J]. 杜方原,冯春燕,王彩霞,仇松寅,张永宁,林祥梅,吴绍强.  细胞与分子免疫学杂志. 2018(12)
[2]大肠杆菌丝状热敏蛋白Z相互作用蛋白A（Ec-ZipA）原核表达、纯化与大鼠多克隆抗体的制备[J]. 陈云雨,牛夏忆,林媛,刘晓平.  细胞与分子免疫学杂志. 2018(10)
[3]抗棉铃虫Ⅳ型几丁质酶（HaCHT4）小鼠多克隆抗体的制备与鉴定[J]. 麦麦提艾力·阿卜杜纳斯尔,古新蓉,马纪,马小丽,刘小宁.  细胞与分子免疫学杂志. 2018(09)
[4]人致病性呼肠孤病毒M3编码蛋白纯化及多克隆抗体制备[J]. 陈江曼,李永刚,王佳美,佟伟,任雨舒,李新.  中国现代医学杂志. 2016(18)



本文编号：3177635