红景天苷对COPD大鼠模型骨骼肌萎缩的保护作用

发布时间：2017-04-20 08:00

  本文关键词：红景天苷对COPD大鼠模型骨骼肌萎缩的保护作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探索红景天苷对被动吸烟COPD大鼠模型骨骼肌萎缩是否具有保护作用,并进行初步的作用机制探讨,为红景天苷应用于治疗COPD患者改善骨骼肌萎缩提供实验依据。方法:60只雄性SD大鼠,按随机原则分为对照组(C)(n=10)、对照+红景天苷组(C/Sa)(n=10)、戒烟组(Q)(n=10)、戒烟+红景天苷组(Q/Sa)(n=10)、被动吸烟组(S)(n=10)、被动吸烟+红景天苷组(S/Sa)(n=10)。采用单纯被动吸烟方法每天2次,每次10只,持续被动吸烟4个月建立COPD大鼠模型,C、C/Sa不进行干预。实验3个月后采用红景天苷干预,红景天苷干预组均采用红景天苷(2mg/ml)10mg/kg.bw灌胃,2天一次,持续一个月,对照组以同样剂量的生理盐水连续灌胃一个月。干预结束后,称量各组大鼠体重。采用小动物呼吸机检测肺功能,同时采集BALF、全血、肺组织、骨骼肌样本进行酶联免疫法(ELISA)检测IL-6、TNF-α、MDA、ROS水平。免疫组织化学法检测骨骼肌中肌肉萎缩素-1(Atrogin-1)、肌肉环状指蛋白(Mu RF-1)表达;RT-PCR检测骨骼肌中Atrogin-1及Mu RF-1m RNA含量;Western blot检测骨骼肌中Atrogin-1及Mu RF-1蛋白含量;提取骨骼肌线粒体电镜下观察骨骼肌线粒体形态学改变。结果:(1)体重比较:S组体重279.77±13.13(g)较C组体重346.67±15.46(g)明显降低,具有统计学意义(p0.05)。Q组体重299.98±15.80(g)较C体重346.67±15.46(g)明显降低,具有统计学意义(p0.05)。Q组体重299.98±15.80(g)较S组体重279.77±13.13 (g)明显增加,具有统计学意义(p0.05)。C组体重346.67±15.46(g)与C/Sa组体重357.39±13.04(g)无统计学意义。Q/Sa组体重322.15±10.49(g)较Q体重299.98±15.80(g)增加,有统计学意义(p0.05)。S/Sa组体298.86±24.56(g)较S组体重279.77±13.13(g)增加,有统计学意义(p0.05)。(2)ROS含量:①肺泡灌洗液(U/ml)中C组18.37±0.19、C/Sa组18.42±0.07、Q组54.01±0.64、Q/Sa干预组36.89±0.71、S组89.67±1.02、S/Sa组71.63±1.70。②肺组织(U/mgprot)中C组18.25±0.16、C/Sa组18.26±0.18、Q组54.10±0.80、Q/Sa组71.97±1.61、S组90.24±1.00、S/Sa组71.63±1.70。③骨骼肌(U/mgprot)中C组18.20±0.06、C/Sa组18.20±0.21、Q组53.71±0.76、Q/Sa组36.75±0.30、S组88.63±0.43、S/Sa组71.36±0.57。④血清(U/ml)中C组18.24±0.19、C/Sa组18.24±0.06、Q组53.92±0.10、Q/Sa组36.79±0.27、S组89.52±0.81、S/Sa组71.76±0.37。各标本中S组较C组浓度增高,有统计学意义(P0.05)。Q组较C组浓度增高,有统计学意义(P0.05)。Q组较S组浓度降低,有统计学意义(P0.05)。C与C/Sa组无统计学意义。Q/Sa组较Q组浓度降低,有统计学意义(P0.05)。S/Sa组较S组浓度降低,具有统计学意义(P0.05)。(3)MDA含量:①肺泡灌洗液(nmol/m L)中C组9.96±1.01、C/Sa组9.75±0.59、Q组19.37±1.16、Q/Sa组15.33±0.16、S组25.29±1.66、S/Sa组21.22±0.91。②肺组织(nmol/mgprot)中C组9.93±0.95、C/Sa组9.90±0.53、Q组19.28±1.21、Q/Sa组15.22±0.38、S组25.22±1.42、S/Sa组21.25±0.93。③骨骼肌(nmol/mgprot)中C组9.77±0.62、C/Sa组9.72±0.26、Q组19.45±1.24、Q/Sa组15.20 ±0.40、S组25.41±1.35、S/Sa组21.27±0.89。④血清(nmol/m L)中C组9.72±0.71、C/Sa组10.02±0.51、Q组19.84±1.17、Q/Sa组15.25±0.65、S组25.43±1.41、S/Sa组21.52±1.40。各标本中S组较C组浓度增高,有统计学意义(P0.05)。Q组较C组浓度增高,有统计学意义(P0.05)。Q组较C组浓度降低,有统计学意义(P0.05)。C与C/Sa组无统计学意义。Q/Sa组较Q组浓度降低,有统计学意义(P0.05)。S/Sa组较S组浓度降低,具有统计学意义(P0.05)。(4)IL-6(pg/ml)含量:①肺泡灌洗液中C组13.48±0.72、C/Sa组13.68±2.74、Q组41.05±4.71、Q/Sa干预组25.15±6.52、S组65.58±6.59、S/Sa组49.78±4.36。②肺组织中C组12.62±6.06、C/Sa组12.33±6.63、Q组41.67±5.25、Q/Sa组24.38±8.19、S组63.94±4.55、S/Sa组49.48±3.20。③骨骼肌中C组14.44±2.17、C/Sa组14.72±7.95、Q组46.50±7.17、Q/Sa组29.98±5.92、S组73.43±3.89、S/Sa组55.93±6.17。④血清中C组13.29±3.26、C/Sa组13.29±2.07、Q组39.96±1.31、Q/Sa组26.77±4.42、S组65.49±7.24、S/Sa组51.63±3.92。各标本中S组较C组浓度增高,有统计学意义(P0.05)。Q组较C组浓度增高,有统计学意义(P0.05)。Q组较S组浓度降低,有统计学意义(P0.05)。C与C/Sa组无统计学意义。Q/Sa组较Q组浓度降低,有统计学意义(P0.05)。S组较S/Sa组浓度降低,具有统计学意义(P0.05)。(5)TNF-α(pg/ml)含量:①肺泡灌洗液中C组11.61±3.70、C/Sa组10.20±3.79、Q组39.34±1.12、Q/Sa组28.24±2.83、S组62.81±1.92、S/Sa组45.32±6.09。②肺组织中C组14.31±4.24、C/Sa组14.56±7.55、Q组49.14±9.42、Q/Sa组27.83±1.94、S组83.70±2.35、 S/Sa组58.18±2.21。③骨骼肌中C组15.21±1.68、C/Sa组16.87±2.94、Q组49.79±2.39、Q/Sa组33.16±9.60、S组79.60±5.58、S/Sa组57.15±5.83。④血清中C组15.59±3.05、C/Sa组15.46±0.80、Q组45.09±3.64、Q/Sa组30.21±1.68、S组82.80±2.35、S/Sa组59.72±2.88。各标本中S组较C组浓度增高,有统计学意义(P0.05)。Q组较C组浓度增高,有统计学意义(P0.05)。Q组较S组浓度降低,有统计学意义(P0.05)。C与C/Sa组无统计学意义。Q/Sa组较Q组浓度降低,有统计学意义(P0.05)。S/Sa组较S组浓度降低,具有统计学意义(P0.05)。(6)免疫组化灰度值:①Atrogin-1蛋白:C组150.83±1.63、C/Sa组148.78±5.34、Q组118.04±3.93、Q/Sa组128.31±5.73、S组94.32±4.77、S/Sa组108.72±3.94。S组较C组阳性表达增强,有统计学意义(P0.05)。Q组较C组阳性表达增强,有统计学意义(P0.05)。Q组较S组阳性表达减弱,有统计学意义(P0.05)。C组与C/Sa组无统计学意义。Q/Sa组较Q组阳性表达减弱,有统计学意义(P0.05)。S/Sa组较S组阳性表达减弱,具有统计学意义(P0.05)。②Mu RF-1蛋白:C组152.85±1.25、C/Sa组151.78±4.69、Q组120.63±4.91、Q/Sa组136.52±2.74、S组100.36±5.33、S/Sa组115.12±4.05。S组较C组阳性表达增强,有统计学意义(P0.05)。S组较C组阳性表达增强有统计学意义(P0.05)。Q组较C组阳性表达减弱,有统计学意义(P0.05)。C组与C/Sa组无统计学意义。Q/Sa组较Q组阳性表达减弱,有统计学意义(P0.05)。S/Sa组较S组阳性表达减弱,具有统计学意义(P0.05)。(7)Atrogin-1 m RNA表达倍数:C组0.87±0.19、C/Sa组1.06±0.12、Q组2.72±0.17、Q/Sa组1.67±0.15、S组4.21±0.27、S/Sa组3.70 ±0.20。S组较C组表达增多,有统计学意义(P0.05)。Q组较C组表达增多,有统计学意义(P0.05)。Q组较S组表达减少,有统计学意义(P0.05)。C组与C/Sa组无统计学意义。Q/Sa组较Q组表达减少,有统计学意义(P0.05)。S/Sa组较S组表达减少,具有统计学意义(P0.05)。(8)Mu RF-1 m RNA表达倍数:C组1.11±0.05、C/Sa组1.07±0.10、Q组2.86±0.35、Q/Sa组1.69±0.08、S组3.88±0.33、S/Sa组3.09±0.56。S组较C组表达增多,有统计学意义(P0.05)。Q组较C组表达增多,有统计学意义(P0.05)。Q组较S组表达减少,有统计学意义(P0.05)。C组与C/Sa组无统计学意义。Q/Sa组较Q组表达减少,有统计学意义(P0.05)。S/Sa组较S组表达减少,具有统计学意义(P0.05)。(9)免疫印迹结果:①Atrogin-1蛋白(OD):C组0.15±0.01、C/Sa组0.15±0.03、Q组0.44±0.04、Q/Sa组0.29±0.03、S组0.75±0.06、S/Sa组0.58±0.05。S组较C组表达增强,有统计学意义(P0.05)。Q组较C组表达增强,有统计学意义(P0.05)。Q组较S组表达减弱,有统计学意义(P0.05)。C组与C/Sa组无统计学意义。Q/Sa组较Q组表达减弱,有统计学意义(P0.05)。S/Sa组较S组表达减弱,具有统计学意义(P0.05)。②Mu RF-1蛋白(OD):C组0.27±0.03、C/Sa组0.28±0.01、Q组0.76±0.08、Q/Sa组0.55±0.05、S组1.29±0.11、S/Sa组1.10±0.10。S组较C组表达增强,有统计学意义(P0.05)。Q组较C组表达增强,有统计学意义(P0.05)。Q组较S组表达减弱,有统计学意义(P0.05)。C组与C/Sa组无统计学意义。Q/Sa组较Q组表达减弱,有统计学意义(P0.05)。S/Sa组较S组表达减弱,具有统计学意义(P0.05)。(10)线粒体形态学观察:S组较C组大量线粒体的嵴断裂、减少、线粒体空泡化;线粒体固、体积缩小。Q组较C组大量线粒体的嵴断裂、减少、线粒体空泡化;线粒体固、体积缩小。S组较Q组大量线粒体的嵴断裂、减少、线粒体空泡化;线粒体固、体积缩小。C组与C/Sa组线粒体形态无明显差异。Q组较Q/Sa组线粒体的嵴断裂、减少、线粒体空泡化;线粒体固、体积缩小现象增多。S组较S/Sa组线粒体的嵴断裂、减少、线粒体空泡化;线粒体固、体积缩小现象增多。(11)Atrogin-1、Mu RF-1 m RNA(倍数)与大鼠体重相关性:Atrogin-1、Mu RF-1 m RNA表达(倍数)与大鼠体重呈负相关(分别为:R=-0.910、P0.01;R=-0.895、P0.01)。结论:(1)被动吸烟可通过与氧化应激-炎症机制导致COPD大鼠模型骨骼肌萎缩;(2)红景天苷可降低被动吸烟COPD大鼠模型BALF、肺组织、血清和骨骼肌的ROS和MDA水平并抑制IL-6和TNF-α的表达,通过抑制的氧化应激-炎症机制改善被动吸烟COPD大鼠模型的骨骼肌萎缩。
【关键词】：红景天苷 吸烟 肺疾病 氧化应激 炎症
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5;R-332
【目录】：

• 主要要缩略词5-6
• 摘要6-12
• Abstract12-21
• 第1章 前言21-25
• 第2章 材料与方法25-39
• 2.1 实验材料25-27
• 2.2 实验方法27-39
• 第3章 结果39-49
• 第4章 讨论49-55
• 第5章 结论55-57
• 参考文献57-63
• 附图63-71
• 文献综述71-81
• 参考文献76-81
• 硕士期间撰写论文81-83
• 致谢83

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本文编号：318202