多重耐药鲍曼不动杆菌噬菌体Abp1毒力蛋白穿孔素的无细胞融合表达

发布时间：2021-05-18 16:27

　　目的研究多重耐药鲍曼不动杆菌噬菌体Abp1毒力蛋白穿孔素holin（holinAbp1）的生物学特性及其对细菌的毒性作用,并通过无细胞蛋白表达系统对毒力蛋白穿孔素融合蛋白进行表达。方法利用生物信息学技术分析holinAbp1的蛋白结构特点,利用PCR技术从噬菌体Abp1基因组扩增holinAbp1基因,构建表达载体pET23bholinAbp1-gfp并转化至大肠杆菌BL21（DE3）中以及无细胞蛋白体系中表达,利用Western印迹鉴定蛋白表达情况。结果噬菌体Abp1的holin蛋白属于稳定疏水性蛋白,含有3个跨膜区域,属于Phage-holin-3-1家族,成功克隆了holinAbp1-gfp基因,holinAbp1-gfp蛋白在大肠杆菌内无法正确表达,对大肠杆菌表达宿主具有明显抑制作用,而在无细胞蛋白表达系统实现了蛋白表达。结论通过无细胞蛋白表达系统实现了holinAbp1-gfp融合蛋白表达,将为毒力蛋白的表达和噬菌体治疗药物的研发提供应用基础和技术支持。 

【文章来源】：军事医学. 2019,43(04)北大核心

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 质粒、菌株与噬菌体
        1.1.2 试剂
    1.2 方法
        1.2.1 穿孔素的生物信息学分析
        1.2.2 质粒构建
        1.2.3 穿孔素融合蛋白对表达宿主生长抑制分析
        1.2.4 CFPS体系中细胞裂解液的制备
        1.2.5 无细胞蛋白表达
        1.2.6 CFPS表达穿孔素融合蛋白的Western印迹鉴定
        1.2.7 穿孔素融合蛋白的相对表达量分析
2结果
    2.1穿孔素holinAbp1的信息学分析
    2.2质粒构建
    2.3 holinAbp1-gfp对表达宿主生长抑制分析
    2.4 CFPS表达holinAbp1-gfp的Western印迹分析
3讨论


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3194115