肺炎链球菌LytR蛋白影响细菌生长和磷壁酸的合成

发布时间：2021-05-20 15:02

　　为了初步明确lytR基因的保守性以及探讨LytR蛋白在肺炎链球菌中的生物学功能。本研究利用PCR和测序方法分析lytR基因20种不同序列型肺炎链球菌临床分离株的保守性;利用Western blotting技术分析lytR在细菌不同生长阶段的表达情况;随后,利用红霉素片段替代lytR基因构建D39ΔlytR缺陷菌株,通过生长曲线分析、电镜下形态观察、以及磷壁酸含量测定揭示LytR蛋白在细菌生长、细菌形态以及磷壁酸合成中的作用。研究发现20种不同序列型肺炎链球菌临床菌株的lytR基因序列一致性>99.3%;Western blotting结果显示lytR在细菌不同生长阶段稳定表达;D39ΔlytR缺陷株生长明显变缓,细菌表现为不成熟自溶;D39ΔlytR全菌磷壁酸含量显著减少,而培养基上清中的磷壁酸含量显著增多。本研究表明lytR基因非常保守,在肺炎链球菌不同生长阶段均有表达,并可能通过连接酶的作用影响细菌生长和参与肺炎链球菌磷壁酸的合成,有望成为一种新的抗生素和药物靶点。 

【文章来源】：基因组学与应用生物学. 2019,38(04)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 结果与分析
    1.1 lytR基因保守性分析
    1.2 不同生长阶段LytR蛋白表达情况分析
    1.3 lytR缺陷菌的构建及鉴定
    1.4 lytR基因缺失导致细菌生长受损
    1.5 lytR与细菌磷壁酸的合成有关
    1.6 lytR影响肺炎链球菌磷壁酸的胞外连接
2 讨论
3 材料与方法
    3.1 菌株
    3.2 试剂和相关材料
    3.3 lytR基因保守性分析
    3.4 PCR扩增lytR基因上、下游侧臂片段
    3.5 肺炎链球菌的实验室转化
    3.6 肺炎链球菌D39ΔlytA、D39ΔlytRΔlytA的构建以及D39ΔlytR compl (回补株) 的构建
    3.7 Western blotting分析
    3.8 生长曲线
    3.9 磷壁酸的ELSIA测定
    3.1 0 磷壁酸的Dot blot测定
    3.1 1 统计学分析
作者贡献


【参考文献】：
期刊论文
[1]大肠杆菌感受态细胞制备及转化条件优化[J]. 代军.  江苏农业科学. 2015(04)
[2]肺炎链球菌假想转录因子LytR的表达、纯化、晶体生长及优化[J]. 闵迅,钟文,赵沙沙,董杰,董珊珊,周爱娥,闫文娟,汪德强.  生物医学工程学杂志. 2013(04)
[3]一种减毒肺炎链球菌溶血素突变体的构建与表达[J]. 吴凯峰,张薇薇,崔亚利,张雪梅,胥文春,庞丹,刘鑫,王虹.  医学分子生物学杂志. 2010 (05)



本文编号：3197960