miR-383通过下调细胞周期相关蛋白的表达抑制小鼠卵泡颗粒细胞的增殖

发布时间：2021-05-21 21:15

　　目的探讨微小RNA-383（miR-383）在小鼠卵泡不同发育阶段的表达规律以及对颗粒细胞增殖的影响。方法取健康雌性受孕昆明小鼠不同小鼠出生后12、 21、 21 d[腹腔注射10 IU孕马血清促性腺激素（PMSG）48 h后]和21 d[腹腔注射10 IU PMSG 48 h和10 IU人绒毛膜促性腺激素（hCG）6 h后]的卵巢组织、卵泡和颗粒细胞,通过实时定量PCR法检测miR-383的表达情况。取小鼠出生21 d的颗粒细胞,分别转染miR-383模拟物（miR-383 mimics）或miR-383抑制物（miR-383 inhibitor）,另外设置阴性对照组。通过噻唑蓝（MTT）法检测颗粒细胞增殖情况,流式细胞术检测颗粒细胞的细胞周期变化。采用Western blot法检测细胞周期相关蛋白细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、 cyclin B、细胞周期蛋白依赖激酶1（CDK1）、 CDK2、 CDK4的蛋白水平。结果与小腔前卵泡相比,大腔前卵泡中miR-383的含量降低,但是在腔较小的有腔卵泡中含量升高,成熟卵泡中的含量又进一步降低。与小腔前卵泡颗粒细胞相比,大腔前卵泡... 

【文章来源】：细胞与分子免疫学杂志. 2019,35(06)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 分离卵泡
        1.2.2 实时荧光定量PCR检测卵泡组织miR-383水平
        1.2.3 颗粒细胞的分离与收集
        1.2.4 颗粒细胞转染
        1.2.5 MTT法检测颗粒细胞增殖
        1.2.6 流式细胞术检测细胞周期
        1.2.7 Western blot法检测颗粒细胞cyclin D1、 cyclin B、 CDK1、 CDK2、 CDK4蛋白水平
        1.2.8 统计学分析
2 结果
    2.1 卵巢组织miR-383水平随小鼠卵泡发育而降低, 超排激素处理的卵巢组织miR-383水平增加
    2.2 小鼠不同发育阶段的卵泡中miR-383水平不同
    2.3 随着小鼠卵泡发育, 颗粒细胞中miR-383水平逐渐降低, 但成熟卵泡颗粒细胞中miR-383的相对含量增加
    2.4 miR-383 mimics或inhibitor瞬时转染效率验证
    2.5 miR-383 mimics转染抑制颗粒细胞增殖, 但miR-383 inhibitor转染作用相反
    2.6 miR-383 mimics或inhibitor转染对颗粒细胞增殖周期的影响
    2.7 miR-383 mimics或inhibitor转染对颗粒细胞周期蛋白表达的影响
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3200391