单纯疱疹病毒1型绿色荧光蛋白真核表达系统的构建及初步应用

发布时间：2021-05-25 09:14

　　目的 构建人单纯疱疹病毒1型（herpes simplex virus，HSV-1）绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）真核表达系统，用于HSV感染的快速诊断。 方法 提取HSV-1 DNA，利用DNA Star软件设计对应于HSV-1 SM44株ICP6启动子的PCR引物，引入BamHI和HindⅢ酶切位点。PCR扩增目的基因片段，将回收纯化的PCR产物连接至pMD18-T载体构建亚克隆，切下目的基因，连接至真核表达载体pEGFP-1构建重组质粒pICP6-EGFP，经双酶切和DNA测序鉴定后，以阳离子脂质体法（Lipofectamine2000）转染Vero细胞。转染48h后，加入G418（400μg／ml）筛选阳性细胞克隆，进行放大培养建立稳定转染细胞株Vero-ICP6-EGFP细胞。以不同量的HSV-1感染Vero-ICP6-EGFP细胞，分别于感染后6h、8h、10h，以倒置荧光显微镜检测GFP荧光；于感染后15h以流式细胞术测定GFP荧光的量和强度；同时以人巨细胞病毒和柯萨奇病毒检测Vero-ICP6-EGFP细胞诱导表达的特异... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
1 前言
2 材料和方法
    2.1 材料
    2.2 目的基因的选择及引物设计
    2.3 目的基因的获得及纯化
    2.4 载体pEGFP-1的制备
    2.5 pICP6-EGFP重组克隆的构建
    2.6 重组质粒pICP6-EGFP的转染及检测
3 结果
    3.1 目的基因的PCR扩增
    3.2 重组质粒pICP6-MD18的鉴定
    3.3 重组pICP6-EGFP质粒的鉴定
    3.4 重组pICP6-EGFP质粒的转染及检测
    3.5 Vero-ICP6-EGFP特异性的检测
4 讨论
5 结论
参考文献
附录
致谢
文献综述



本文编号：3205088