Tim-3调控T细胞IL-2表达的机制研究

发布时间：2021-06-02 20:59

　　目的探究T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3（Tim-3）对白细胞介素-2（IL-2）的调控作用及机制。方法通过酶联免疫吸附实验（ELISA）、流式细胞术（FACS）以及实时定量荧光聚合酶链反应（RT-PCR）方法,检测T细胞活化后,Jurkat高表达Tim-3（JurkatTim-3-high）与低表达Tim-3（JurkatTim-3-low）细胞系中IL-2的基因转录及蛋白表达水平;使用中和性抗人Tim-3抗体阻断Jurkat细胞系中Tim-3功能,ELISA及RT-PCR方法检测IL-2蛋白分泌及转录水平变化;通过Western蛋白免疫印迹法检测Tim-3对IL-2表达调控相关分子[包括蛋白激酶C（PKC）β1及核因子（NF）-κB亚基P65]的磷酸化的影响。结果 ELISA、FACS和RT-PCR结果均表明,Tim-3抑制IL-2的表达,使用抗人Tim-3抗体阻断后,IL-2的表达上调;Western印迹结果显示,与JurkatTim-3-low细胞相比,JurkatTim-3-high细胞中蛋白激酶PKCβ1及NF-κB亚基P65的磷酸化受到明显抑制。使用中和性抗人Tim-3抗体阻断... 

【文章来源】：军事医学. 2019,43(06)北大核心

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1 1.1 材料
    1 1.2 方法
        1.2.1 JurkatTim‐3‐high与JurkatTim‐3‐low细胞的体外培养
        1.2.2 双抗体夹心法ELISA测定上清中IL‐2蛋白水平
        1.2.3 RNA样品的提取及RT‐PCR检测其IL‐2基因转录水平的变化
        1.2.4 Western印迹检测不同条件处理后蛋白的磷酸化水平
    1.3 统计学分析
2结果
    2.1 Tim‐3抑制IL‐2基因转录及蛋白表达
    2.2 Tim‐3抗体阻断Tim‐3对T细胞的抑制效应
    2.3 Tim‐3可能通过抑制PKCβ1及NF‐κB的磷酸化负调控的表达
    2.4 Tim‐3抗体通过抑制PKCβ1及NF‐κB的磷酸化负调控IL‐2的表达
3讨论



本文编号：3210742