间充质干细胞的条件培养上清影响PC12细胞帕金森病模型增殖的作用研究

发布时间：2017-04-23 01:04

  本文关键词：间充质干细胞的条件培养上清影响PC12细胞帕金森病模型增殖的作用研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)可以通过分化为神经元样细胞、调节免疫和诱导原位神经生长因子的分化等机制发挥神经修复及促进神经系统生长的作用。粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor, G-CSF)可以促进神经分化和神经元增殖、抵抗神经系统病变时的炎症,具有明显的对神经系统的保护作用,可以促进神经损伤时结构的重建与功能的修复。帕金森病(Parkinson's disease, PD)是一种以中脑黑质-纹状体通路内的多巴胺能神经元进行性退变为主要病理特征的病变。我们运用MSCs的条件培养上清刺激PC12细胞的帕金森病细胞模型的增殖,以此验证MSCs的促神经生长作用,并且推测其中含有G-CSF的条件培养上清促进实验细胞增值的作用更强。目的分离、培养以及鉴定间充质干细胞,探讨其条件培养上清对PC12细胞及该细胞帕金森病模型增殖的影响。方法我们采用组织块贴壁法从脐带组织中分离出长梭形细胞,后用流式细胞术鉴定其免疫表型,用染色法鉴定其成脂与成骨分化能力；用Mpp+处理PC12细胞的方法建立PD细胞模型；之后用刀豆素A (conA)刺激MSCs后收集其条件培养上清,比较观察其与正常MSCs上清对PC12及其PD模型增殖能力的影响,并用酶联免疫吸附法(ELISA)检测两种上清内粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的含量。结果1.应用组织块贴壁法分离脐带间充质干细胞,对分离得到的细胞培养后进行免疫表型鉴定示其高表达干细胞表面标志CD105、CD73、CD90,而不表达造血细胞表面标志CD19、CD34和CD45,符合MSCs表型特征。2.用以上同样方法检测加入诱导剂conA的MSCs,经过诱导后的MSCs细胞表型未发生改变。3.对实验分离细胞在不同培养基中进行成脂及成骨诱导分化,后分别经过ALP染色和Oil red O染色鉴定,实验中分离的细胞具有良好的成脂与成骨分化能力。同样方法鉴定经conA处理的MSCs成骨、成脂分化能力未发生明显变化。4.经过cck-8试剂盒检测,经过Mpp+处理PC12细胞模型组细胞数量是正常组细胞数量的一半。5.与对照组相比,MSC条件培养上清可提高PC12细胞及其帕金森病模型组细胞的增殖能力,而经conA处理后的MSC条件上清对细胞增殖能力的促进作用更加显著,差别有统计学意义。6.经过ELISA检测,经过conA诱导的MSC条件培养上清中G-CSF浓度(33.52pg/mL)显著高于未经处理的MSC上清中的含量(12.03pg/mL)结论1.实验分离得到的细胞为间充质干细胞,conA的诱导不改变其MSC细胞学特性。2.PC12细胞PD细胞模型造模成功。3.MSCs条件培养上清可以促进PC12细胞及其PD细胞模型的增殖,G-CSF可能具有显著促进实验细胞增殖的作用。
【关键词】：间充质干细胞 PC12细胞 帕金森病 增殖 粒细胞集落刺激因子
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R742.5;R-332
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-13
• 实验材料13-17
• 实验方法17-24
• 实验结果24-25
• 讨论25-31
• 结论31-32
• 附图32-35
• 参考文献35-40
• 综述：造血调控因子在神经系统中的作用40-53
• 参考文献48-53
• 附录53-55
• 攻读学位期间发表文章情况55-56
• 致谢56-58
• 个人简历58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 黄树其;谢雪微;赵正卿;邵福源;;促红细胞生成素对血管性痴呆大鼠模型海马神经细胞凋亡的影响[J];中国临床神经科学;2012年03期

2 杨默,夏文杰,李桂霞,庞雅轩,戚其威,李志光,吴香玲,吴浩强,冯国培,霍泰辉;中枢神经系统表达TPO受体的初步研究(英文)[J];中国实验血液学杂志;2004年04期

3 季兴华;霍建忠;;外源性粒-巨噬细胞集落刺激因子在硬脊膜损伤修复中的实验研究[J];中国药物与临床;2013年02期

4 葸瑞;白海;王存邦;路奎;;脐带间充质干细胞治疗帕金森症临床疗效观察[J];中华细胞与干细胞杂志(电子版);2012年04期

  本文关键词：间充质干细胞的条件培养上清影响PC12细胞帕金森病模型增殖的作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：321566