幽门螺杆菌HpaA-CtxB融合蛋白的研制及免疫原性研究

发布时间：2021-06-11 01:07

　　目的：用基因工程技术克隆和表达H.pylori 的hpaA基因，以纯化的重组蛋白为抗原，建立检测血清HpaA抗体的间接ELISA法，探讨以重组蛋白作为抗原在诊断H.pylori感染中的价值。方法：用PCR方法从H.pylori DNA中扩增hpaA基因片段。插入原核表达载体pQE30，转化受体菌DH5a，克隆及序列分析后在大肠杆菌中进行高效表达，表达产物经纯化和Western blot鉴定后，作为抗原,建立检测血清H.pylori HpaA抗体的间接ELISA法，与科研诊断标准比较评价其应用的可行性。结果： 1.重组表达质粒pQE30-hpaA构建成功,序列分析所得序列完整，插入的基因片段全长783bp，与基因文库中的hpaA基因同源性达97.3%；2. SDS-PAGE显示表达产物相对分子量为30 000，表达量占全菌总量的31.67%；3. Western blot显示该蛋白可被病人血清所识别；4.SDS-PAGE分析表达形式，蛋白主要存在于细菌裂解液上清中，部分存在于包涵体中,经Ni2+-NTA树脂对上清进行纯化后，可得到纯度90%以上的蛋白质；5.重组蛋白免疫兔后的免疫血清双扩... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
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第一部分 幽门螺杆菌粘附素hpaA基因的原核表达及初步应用
    中文摘要
    英文摘要
    前言
    材料和方法
    结果
    讨论
    小结
    参考文献
第二部分 幽门螺杆菌HpaA-CtxB融合蛋白的研制及免疫原性研究
    中文摘要
    英文摘要
    前言
    材料和方法
    结果
    讨论
    小结
    参考文献
文献综述
致谢
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本文编号：3223484