Renca细胞exosomes所诱导的CD8 + T细胞的特异性杀伤作用

发布时间：2021-06-12 09:16

　　目的检测Renca细胞exosomes对CD8⁺T细胞的激活效应以及exosomes负载的树突状细胞（DCs）所诱导的CD8⁺T细胞对Renca细胞特异性杀伤作用。方法采用超速离心法从Renca细胞无血清上清液中提取出exosomes并鉴定,体内通过流式和ELISA;体外通过CFSE荧光染色和ELISA检测exosomes对CD8⁺T细胞的激活效应。小鼠骨髓分离出DCs并进行体外培养,用exosomes冲击成熟的DCs然后活化CD8⁺T细胞,测定其对Renca、4T1、CT26细胞的杀伤率。结果透射电镜下观察exosomes是直径在30～100 nm的盘状囊泡,Western blot检测exosomes高表达MHC-1和HSP70。Exosomes能在体内和体外促进CD8⁺T细胞的增殖和激活效应。在体外杀伤实验中,exosomes冲击的DCs所诱导的CD8⁺T细胞相对于4T1和CT26细胞,其对Renca细胞具有明显更强的杀伤作用。结论 Renca细胞e... 

【文章来源】：免疫学杂志. 2019,35(07)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要细胞、动物、试剂与仪器
    1.2 细胞培养
    1.3 Exosomes的提取
    1.4 Exosomes的形态学观察
    1.5 Western blot分析
    1.6 流式检测CD8+/CD4+T比例
    1.7 磁珠分选CD8+T细胞
    1.8 CFSE标记的CD8+T细胞的增殖实验
    1.9 ELISA检测IFN-γ水平
    1.1 0 DCs的体外培养
    1.1 1 细胞毒性实验
    1.1 2 统计学分析
2 结果
    2.1 Exosomes的电镜形态
    2.2 Exosomes的蛋白成分分析
    2.3 Exosomes改变了体内CD8+/CD4+T细胞比例
    2.4 Exosomes促进了CD8+T细胞的体外增殖
    2.5 Exosomes在体外促进了CD8+T细胞IFN-γ的分泌
    2.6 Exosomes促进了体内CD8+T细胞IFN-γ的分泌
    2.7 DCs的形态特征
    2.8 负载exosomes的DCs诱导的CD8+T细胞的特异性杀伤
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]肿瘤外泌体对免疫细胞的作用[J]. 周虎,张丽峰,冷静.  免疫学杂志. 2018(10)
[2]小鼠骨髓树突状细胞体外培养扩增与生物学特性研究[J]. 刘晓玲,郭红月,董猛,宋振川.  肿瘤预防与治疗. 2014(01)
[3]IL-18基因修饰对肺癌细胞来源exosome诱导杀伤肿瘤细胞作用的影响[J]. 张在云,李晓梅,王涓冬,孙建华,姜玉华,潘祥林.  中国病理生理杂志. 2011(09)
[4]小鼠骨髓源树突状细胞体外诱导培养及初步鉴定[J]. 刘铮,代继宏,符州,冯琳琳.  生物学杂志. 2011(02)



本文编号：3226351