初级纤毛在肺微血管内皮细胞抗缺氧损伤中的作用研究
发布时间：2021-06-17 20:30
目的研究初级纤毛在肺内皮细胞抗缺氧损伤中的作用及机制。方法将肺微血管内皮细胞（PMVEC）培养至接近融合时,置于密闭缺氧盒中处理0、6、12、18和24h,观察处理不同时间后的细胞形态和初级纤毛长度的变化。用RNA干扰法（siRNA）抑制IFT-88的表达以观察PMVEC初级纤毛的发生情况,同时以无意义干扰序列作为阴性对照组（对照组）。将对照组和siRNA组同时置于缺氧环境0、6、12、18和24 h,检测各时间点的活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）含量,谷胱甘肽氧化物酶（GSP-PX）和超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果缺氧导致PMVEC细胞受损,且初级纤毛长度较常氧环境下显著增加（P<0.01）。IFT88表达被干扰后PMVEC的初级纤毛发生受抑制。对照组PMVEC的ROS、MDA水平在缺氧后逐渐升高,12 h时达到峰值,之后开始下降,24 h后又略有回升;GSH-PX和SOD活性逐渐升高,至12 h时达到峰值,之后持续下降（P<0.01）。siRNA组的ROS和MDA水平随着缺氧时间的延长持续升高,GSH-PX和SOD活性无明显变化。结论纤毛参与了胞外缺氧及氧化胁迫信...
【文章来源】：解放军医药杂志. 2019,31(05)
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
不同时间缺氧后肺内皮细胞株PMVEC的形态学变化(SP×4)ABCDE
皮细胞株PMVEC的形态学变化(SP×4)A．缺氧0h;B．缺氧6h;C．缺氧12h;D．缺氧18h;E．缺氧24h2.2PMVEC初级纤毛在缺氧环境的变化PM-VEC初级纤毛在常氧环境的长度为(1．55±0．44)μm，(见图2A);但在缺氧环境其长度显著增加，缺氧18h时达到高峰，长度为(4．52±1．04)μm(P＜0.01)，(见图2B～2D);但在缺氧24h后其长度又略微变短，下降至(3．61±1．22)μm，(见图2E);仍显著长于常氧环境(P＜0.01)。见图3。ABCDE图2不同时间缺氧后PMVEC细胞初级纤毛长度(免疫荧光×40)A．缺氧0h;B．缺氧6h;C．缺氧12h;D．缺氧18h;E．缺氧24h·11·
6543210初级纤毛长度(um)b0%612%18%24缺氧处理时间(h)bbb图3不同时间缺氧后PMVEC细胞的初级纤毛长度变化与缺氧0h时比较，bP＜0.012.3干扰IFT88基因表达对初级纤毛发生的影响siRNA组和阴性组的细胞转染成功率(成功转染的细胞显示绿色荧光)均在70%以上(见图4)。转染24h后，siRNA组IFT88的mRNA表达量和蛋白表达量显著低于对照组(P＜0.05)(图5A、5B)，siRNA组细胞的初级纤毛消失(见图6)。对照组siRNA组图4重组质粒对PMVEC细胞的转染效率(免疫荧光×4)2.4初级纤毛对PMVEC氧化指标的影响对照组MDA含量随缺氧时间的延长而升高，至12h时达高峰(P＜0.01)，之后开始下降，18、24h后的MDA含量均低于12h，24h的含量略高于18h(见图7A)。活性氧(ROS)水平呈相同的变化趋势，即缺氧12h后达到最高水平，之后趋于下降，虽然24h后略有回升，但仍低于12h(图7B)。siRNA组的MDA含量在0、6、12h与对照组相同，但之后持续增加，至24h达到最高水平，并在18h后显著高于对照组(P＜0.01)。ROS水平的变化与MDA相同，虽然在0、6、12h与对照组处于同一水平，之后持续上升，至18h显著高于对照组(P＜0.01)，24h达到最高值。2.5初级纤毛对PMVEC抗氧化指标的影响，对照组SOD和GSH-PX缺氧后酶活性逐渐增加，至12h达到峰值，之后持续下降，24h后的酶活性更低于18h，但仍显著高于0h(P＜0.05)。siRNA组的SOD和GSH-PX活性虽然也呈现先增加后下降的变化趋势，但变化幅度很小，比较差异无统计学意?
【参考文献】：
期刊论文
[1]Primary cilia as a novel horizon between neuron and environment[J]. Gregory W.Kirschen,Qiaojie Xiong. Neural Regeneration Research. 2017(08)
[2]缺氧环境对PC12细胞初级纤毛长度的影响[J]. 漆欣柱,马慧萍,王昕,杨芳芳,葸慧荣,马骏. 解放军医药杂志. 2016(07)
[3]乙酰唑胺对PC12细胞缺氧损伤的保护作用及其机制研究[J]. 姚娟,马慧萍,李倩,李琳,贾正平,景临林,樊鹏程. 中国药理学通报. 2012(09)
本文编号：3235871
【文章来源】：解放军医药杂志. 2019,31(05)
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
不同时间缺氧后肺内皮细胞株PMVEC的形态学变化(SP×4)ABCDE
皮细胞株PMVEC的形态学变化(SP×4)A．缺氧0h;B．缺氧6h;C．缺氧12h;D．缺氧18h;E．缺氧24h2.2PMVEC初级纤毛在缺氧环境的变化PM-VEC初级纤毛在常氧环境的长度为(1．55±0．44)μm，(见图2A);但在缺氧环境其长度显著增加，缺氧18h时达到高峰，长度为(4．52±1．04)μm(P＜0.01)，(见图2B～2D);但在缺氧24h后其长度又略微变短，下降至(3．61±1．22)μm，(见图2E);仍显著长于常氧环境(P＜0.01)。见图3。ABCDE图2不同时间缺氧后PMVEC细胞初级纤毛长度(免疫荧光×40)A．缺氧0h;B．缺氧6h;C．缺氧12h;D．缺氧18h;E．缺氧24h·11·
6543210初级纤毛长度(um)b0%612%18%24缺氧处理时间(h)bbb图3不同时间缺氧后PMVEC细胞的初级纤毛长度变化与缺氧0h时比较，bP＜0.012.3干扰IFT88基因表达对初级纤毛发生的影响siRNA组和阴性组的细胞转染成功率(成功转染的细胞显示绿色荧光)均在70%以上(见图4)。转染24h后，siRNA组IFT88的mRNA表达量和蛋白表达量显著低于对照组(P＜0.05)(图5A、5B)，siRNA组细胞的初级纤毛消失(见图6)。对照组siRNA组图4重组质粒对PMVEC细胞的转染效率(免疫荧光×4)2.4初级纤毛对PMVEC氧化指标的影响对照组MDA含量随缺氧时间的延长而升高，至12h时达高峰(P＜0.01)，之后开始下降，18、24h后的MDA含量均低于12h，24h的含量略高于18h(见图7A)。活性氧(ROS)水平呈相同的变化趋势，即缺氧12h后达到最高水平，之后趋于下降，虽然24h后略有回升，但仍低于12h(图7B)。siRNA组的MDA含量在0、6、12h与对照组相同，但之后持续增加，至24h达到最高水平，并在18h后显著高于对照组(P＜0.01)。ROS水平的变化与MDA相同，虽然在0、6、12h与对照组处于同一水平，之后持续上升，至18h显著高于对照组(P＜0.01)，24h达到最高值。2.5初级纤毛对PMVEC抗氧化指标的影响，对照组SOD和GSH-PX缺氧后酶活性逐渐增加，至12h达到峰值，之后持续下降，24h后的酶活性更低于18h，但仍显著高于0h(P＜0.05)。siRNA组的SOD和GSH-PX活性虽然也呈现先增加后下降的变化趋势，但变化幅度很小，比较差异无统计学意?
【参考文献】：
期刊论文
[1]Primary cilia as a novel horizon between neuron and environment[J]. Gregory W.Kirschen,Qiaojie Xiong. Neural Regeneration Research. 2017(08)
[2]缺氧环境对PC12细胞初级纤毛长度的影响[J]. 漆欣柱,马慧萍,王昕,杨芳芳,葸慧荣,马骏. 解放军医药杂志. 2016(07)
[3]乙酰唑胺对PC12细胞缺氧损伤的保护作用及其机制研究[J]. 姚娟,马慧萍,李倩,李琳,贾正平,景临林,樊鹏程. 中国药理学通报. 2012(09)
本文编号：3235871
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