选择性封闭肿瘤STAT3的新型溶瘤腺病毒M3的构建及应用

发布时间：2021-06-21 08:49

　　第一部分选择性封闭肿瘤STAT3的新型溶瘤腺病毒M3的构建目的本实验室的第一代腺病毒载体（Ad5/dE1/TK）不能复制,体内存在时间短;第二代腺病毒载体（Ad5/dE1A/6.7K/gp19K）能复制,有一定的选择性,病毒裂解肿瘤细胞释放的肿瘤抗原可激发机体的特异性免役反应,对正常细胞有一定的毒性;针对以上两种腺病毒载体缺点,本课题构建一种具有更高肿瘤特异性的新型溶瘤腺病毒基因治疗载体（Ad5/dE1A/ADP）,并将该载体和癌症治疗的一个理想靶点相结合-命名为M3,使之具有更高的选择性复制能力、病毒扩增量大、高效表达靶基因、有一定程度的免疫逃避能力和对正常细胞几无毒性的特点,具有强大的肿瘤特异性杀伤效应,为肿瘤的治疗提供了一个强有力的工具。方法应用层析技术获取腺病毒的TP-DNA,二次PCR技术对Ad5基因组E3区的ADP基因进行定点缺失,通过限制酶消化、连接酶连接、转化、克隆、体外同源重组、钙磷转染、细胞病毒内包装、腺病毒单克隆纯化等技术获得重组腺病毒,通过PCR扩增、测序技术对该重组腺病毒进行鉴定。CsCl梯度液超速离心获得纯化的重组腺病毒。结果成功的获得了具有高包装效率的腺病... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

目前已有多种条件复制性腺病毒载体用于研究，部分已进入Ⅰ-Ⅱ临床（表1-1）

33图 1 PCR 产物 1％琼脂糖凝胶结果先以引物1和2，引物3和4分别扩增片段1及片段2 （22物为模版，行第三轮PCR反应获得E3/ΔADP DNA片段（-E3/ΔADP酶切鉴定及测序分析结果：将E3/ΔA粒中后经限制酶消化初步鉴定后送测序确认，eBank中提交的Ad5基因组序列完全一致（缺失

34（B）2 pcDNA3.1-E3/ΔADP酶切鉴定及测序分析结P经限制酶消化后的产物1％的琼脂糖凝胶电泳。M：NA3.1质粒；lane 2：E3/ΔADP反向插入pcDNA3.1质/ΔADP。B：pcDNA3.1-E3/ΔADP经4次连续测序，结


本文编号：3240373