灵长类动物限制性因子SAMHD1的生物学功能分析

发布时间：2021-06-29 03:01

　　目的:探讨不同灵长类动物限制因子不育-α-基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1 （SAMHD1）的抗病毒、抑制逆转录转座子LINE-1和减弱干扰素（IFN）产生信号通路等作用,为灵长类动物SAMHD1的研究提供依据。方法:构建稳定表达不同灵长类动物SAMHD1蛋白的U937细胞系,以空载体构建的细胞作为阴性对照组,以稳定表达不同灵长类动物SAMHD1蛋白的U937细胞系为实验组。经佛波酯（PMA）刺激分化成巨噬样细胞后,流式细胞术分析各组HIV-1病毒感染率。以单独转染SAMHD1表达质粒的HEK293T细胞为对照组,共同转染SAMHD1与HIV-2/SIV Vpx表达质粒的细胞为实验组,转染后48h收获细胞,采用Western blotting法检测SAMHD1蛋白表达水平,免疫荧光检测法观察不同SAMHD1蛋白的细胞内定位。以单独转染LINE-1-GFP报告质粒的HEK293T细胞作为对照组,以共同转染LINE-1-GFP与SAMHD1表达质粒的细胞为实验组,采用流式细胞术检测GFP阳性细胞率,代表SAMHD1对LINE-1转座子的活性。以单独转染IFN-luc报... 

【文章来源】：吉林大学学报(医学版). 2019,45(03)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞、质粒和主要试剂
    1.2 细胞培养
    1.3 SAMHD1稳定表达细胞系的建立和抗病毒实验
    1.4 Western blotting法检测病毒蛋白Vpx诱导灵长类动物限制因子SAMHD1降解
    1.5 灵长类动物SAMHD1蛋白的细胞内定位
    1.6 流式细胞术检测灵长类动物SAMHD蛋白对LINE-1转座子的活性
    1.7 化学发光仪检测HEK293T细胞中荧光素酶活性
    1.8 统计学分析
2 结果
    2.1 灵长类动物HIV-1病毒感染率
    2.2 灵长类动物SAMHD1被病毒蛋白Vpx诱导降解后蛋白表达水平
    2.3 灵长类动物细胞中SAMHD1蛋白的定位
    2.4 各种灵长类动物SAMHD1对LINE-1转座子的活性
    2.5 各组HEK293T细胞中荧光素酶活性
3 讨论



本文编号：3255586