角质细胞生长因子在大肠杆菌中的表达、纯化及生物学活性研究

发布时间：2021-07-12 23:44

　　角质细胞生长因子（KGF）是成纤维细胞生长因子（FGF）家族的成员之一，又称FGF-7。KGF通过旁分泌方式特异性刺激上皮细胞的生长、分化、迁移，在治疗皮肤创伤、角膜损伤、消化性溃疡及放化疗损伤防护等方面具有诱人的应用前景。但由于其在人体中含量极低，KGF的研究与应用受到很大限制，因此利用基因工程方法制备大量、高活性的KGF，成为研究的重点。本文在原有工作的基础上，对工程菌的诱导表达条件、产物的纯化及生物学活性进行探讨，为建立规模化生产KGF的下游技术提供科学依据。 采用分批培养，对工程菌表达融合蛋白GST-KGF的条件进行研究。结果表明，GST-KGF可溶表达的最佳条件为：诱导温度25℃，诱导物IPTG浓度0.3mmol／L，诱导时菌体密度OD₆₀₀约为0.97，诱导时间5h。在该诱导条件下，可溶性的融合蛋白GST-KGF表达量约占菌体总蛋白的4.2％，几发酵液可收获25mg左右的GST-KGF。 针对融合蛋白与还原型谷胱苷肽（GSH）和肝素具有特异性的亲和力，我们采用GSH-Sepharose 4B和Heparin-Sepharose CL-6B两... 

【文章来源】：厦门大学福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
前言
    1.1 生长因子与创伤修复
    1.2 KGF的研究进展
    1.3 重组人KGF的研究概况
    1.4 本文的研究目的与内容
材料与方法
    2.1 材料
    2.2 方法
结果与分析
    3.1 表达质粒的酶切鉴定
    3.2 融合蛋白GST-KGF的诱导表达
    3.3 融合蛋白GST-KGF的诱导表达条件的研究
    3.4 表达产物的纯化
    3.5 表达产物的免疫学活性
    3.6 重组人KGF对小鼠角膜上皮细胞促增殖作用
    3.7 重组人KGF对小鼠烫伤面愈合的促进作用
讨论
    4.1 融合蛋白质GST-KGF的表达
    4.2 融合蛋白质GST-KGF的纯化
    4.3 KGF生物学活性的检测
结论与展望
    5.1 结论
    5.2 今后工作展望
参考文献
致谢



本文编号：3280886