激肽释放酶腺相关病毒载体的构建及其在人脐静脉内皮细胞中的表达

发布时间：2021-07-13 04:23

　　目的：构建携带人激肽释放酶（KK）基因的重组腺相关病毒载体，测定其感染滴度，并观察以不同滴度的病毒感染人脐静脉内皮细胞后KK基因的表达差异。探讨通过腺相关病毒载体导入KK基因治疗高血压的可行性。 方法：1、将人激肽释放酶（KK）基因定向克隆入腺相关病毒载体质粒pAAV-MCS中构建成pAAV／KK。2、pAAV／KK和另外两种质粒pHelper、pAAV-RC通过脂质体共转染AAV-293细胞，包装成带有目的基因的重组病毒。收集病毒颗粒，同时以pAAV-LacZ作为报告基因和pHelper、pAAV-RC三种质粒在和pAAV／KK完全相同的条件下共转染AAV-293细胞，通过β-半乳糖苷酶染色测定转染率，收集病毒原液。以不同稀释梯度的病毒感染HT-1080细胞，通过β-半乳糖苷酶染色测定病毒滴度。3、以不同滴度的病毒分别感染体外培养的脐静脉内皮细胞株（HUVEC）。培养72小时后，RT-PCR定量检测KK在该细胞中表达。 结果：1、成功构建了重组AAV人激肽释放酶载体，2、藉β-半乳糖苷酶原位染色法检测报告基因LacZ在人纤维肉瘤细胞（HT1080）中的表达测得重组病毒滴度... 

【文章来源】：福建医科大学福建省

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

堵乔田AAV一293细胞X200293细胞呈多角形，贴壁较疏松，细胞之间相互连成网状，并有聚集成团的倾向

共转染照片DNA:脂质体=6:6(ug:ul)X100(该比例下蓝染的细胞最多)

共转染照片蓝染的细胞即为包装有重组腺相关病毒的细胞(处)DNA::ugulX0

【参考文献】：
期刊论文
[1]腺相关病毒载体介导的人内皮抑素的体外表达及对内皮细胞抑制作用的研究[J]. 高雪军,伍志坚,吴小兵,封多佳,侯云德.  病毒学报. 2002(03)
[2]人组织型激肽释放酶基因降低果糖诱导高血压大鼠的血压并改善高胰岛素血症[J]. 赵春霞,汪培华,李宏伟,肖啸,Lee Chao,汪道文.  中国分子心脏病学杂志. 2002(04)



本文编号：3281337