圣路易斯脑炎病毒NS2B-NS3蛋白酶的原核表达及其抑制剂的筛选

发布时间：2021-07-14 18:43

　　【目的】圣路易斯脑炎病毒（St. Louis encephalitis virus,SLEV）属于黄病毒科,是一种单股正链RNA病毒。黄病毒编码的非结构蛋白NS3在病毒复制以及多聚蛋白加工过程中起着重要作用,NS2B是其发挥作用的重要辅助因子。因此,NS2B-NS3蛋白酶复合物是抗病毒药物的重要靶标。本研究旨在构建SLEV NS2B-NS3蛋白酶的原核表达系统并建立其抑制剂的高通量筛选方法,从而发现其小分子抑制剂。【方法】通过PCR扩增SLEVNS2B-NS3蛋白的编码区,构建原核表达质粒;在大肠杆菌BL21（DE3）中,经异丙基硫代半乳糖苷（Isopropyl β-D-thiogalactoside）诱导得到可溶性的NS2B-NS3蛋白,并用镍亲和层析方法进行纯化;基于荧光共振能量转移（Fluorescence resonance energy transfer）技术检测NS2B-NS3蛋白酶活性,建立其抑制剂的高通量筛选平台。【结果】SLEV NS2B-NS3蛋白酶纯化程度高达95%以上,基于酶活测定的抑制剂筛选平台准确可行。对700多个上市药物进行筛选后,发现原花青素对SLEVN... 

【文章来源】：微生物学报. 2019,59(04)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 实验材料
    1.2 SLEV NS2B-NS3蛋白酶重组质粒的构建及鉴定
    1.3 SLEV NS2B-NS3蛋白酶的表达与纯化
    1.4 SLEV NS2B-NS3蛋白酶的丝氨酸蛋白酶活性检测
    1.5 SLEV NS2B-NS3的丝氨酸蛋白酶抑制剂筛选平台的建立
2 结果和分析
    2.1 重组质粒SLEV NS2B-NS3的构建及鉴定
    2.2 SLEV NS2B-NS3蛋白酶的表达与纯化
    2.3 SLEV NS2B-NS3的丝氨酸蛋白酶活性的测定
    2.4 SLEV NS2B-NS3蛋白酶抑制剂的筛选
3 讨论



本文编号：3284681