NIK基因对巨噬细胞炎症作用负性调控作用的研究

发布时间：2021-07-22 01:54

　　NF-κB-inducing kinase（NIK）作为MAP3K家族中的一员,在一些生理过程的形态发生中起控制作用,同时也是促炎信号转导通路的重要分子,在IKK/NF-κB、JNK、ERK、p38 MAPK通路以及AP-1的活化过程中扮演重要角色,并且可以调控介导炎症反应的基因的表达。NIK在自身免疫及获得性免疫反应过程中发挥着关键作用。NIK在B细胞NF-κB活化及JNK活化中不可或缺;同时,NIK在TCR介导NF-κB活化及MAPKs活化,以及T细胞成熟、增殖中发挥关键作用。NIK基因对中性粒细胞,单核细胞及巨噬细胞等髓样细胞的影响还未见报道。本实验以小鼠单核细胞（J774A.1）、小鼠腹腔巨噬细胞（pMac）、小鼠骨髓衍生细胞（BMDM）为实验对象,应用NIK siRNA干扰抑制NIK表达,western-blot检测相关蛋白、ELISA检测相关细胞因子,从而研究NIK基因在巨噬细胞中的调控作用。LPS刺激J774A.1细胞时,随着刺激时间的增加,NIK活化呈现递增趋势,在40min时p-NIK表达最多（P<0.01）;LPS的浓度在10ng/ml-1000ng/ml时,... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
第二章 实验材料与仪器
    2.1 细胞株
    2.2 动物
    2.3 试剂
    2.4 溶液配制
    2.5 仪器
第三章 实验方法
    3.1 细胞培养
        3.1.1 J774A.1 细胞冻存
        3.1.2 J774A.1 细胞复苏
        3.1.3 J774A.1 细胞培养
        3.1.4 pMac细胞提取
        3.1.5 BMDM细胞提取
    3.2 LPS刺激时间优化
        3.2.1 细胞准备
        3.2.2 LPS刺激
        3.2.3 蛋白提取
        3.2.4 蛋白免疫检测
    3.3 LPS刺激浓度优化
        3.3.1 细胞准备
        3.3.2 LPS刺激
        3.3.3 蛋白提取
        3.3.4 蛋白免疫检测
        3.3.5 统计分析
    3.4 NIK SIRNA干扰J774A.1 对NIK、MEKK3蛋白表达影响
        3.4.1 细胞准备
        3.4.2 电穿孔转染
        3.4.3 LPS刺激
        3.4.4 蛋白提取及western-blot检测
    3.5 NIK SIRNA干扰对PMAC细胞因子IL-1Β、IL-6、TNFΑ 分泌影响
        3.5.1 细胞准备
        3.5.2 电穿孔转染
        3.5.3 LPS刺激
        3.5.4 培养液收集
        3.5.5 ELISA检测细胞因子IL-1β、IL-6、TNFα
        3.5.6 统计分析
    3.6 NIK SIRNA干扰BMDM细胞TNFΑ 分泌的影响
        3.6.1 细胞准备
        3.6.2 电穿孔转染
        3.6.3 LPS刺激
        3.6.4 培养液收集
        3.6.5 ELISA检测细胞因子TNFα
        3.6.6 统计分析
第四章 结果与讨论
    4.1 J774A.1 细胞培养结果
    4.2 LPS刺激时间优化结果
    4.3 LPS刺激浓度优化结果
    4.4 NIK SIRNA干扰对NIK、MEKK3蛋白表达影响
    4.5 NIK SIRNA干扰对PMAC细胞因子IL-1Β、IL-6、TNFΑ 分泌影响
    4.6 NIK SIRNA干扰BMDM细胞TNFΑ 分泌的影响
    4.7 讨论
    4.8 结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]巨噬细胞的分类及其调节性功能的差异[J]. 李丹,任亚娜,范华骅.  生命科学. 2011(03)
[2]靶向Tak1基因的siRNA干扰对小鼠腹腔巨噬细胞的生物学效应[J]. 王钦富,李坤,李志,徐娜,董敏,韩慧.  中国医药生物技术. 2011(01)



本文编号：3296206