抗柯萨奇病毒A16型单克隆抗体的制备和应用

发布时间：2021-07-23 06:25

　　目的制备抗CA16病毒的特异性单克隆抗体,评价单克隆抗体在ELISA和细胞免疫化学染色中的作用,并利用单抗建立CA16快速检测胶体金免疫层析法并对其进行初步评价。方法 CA16病毒接种RD细胞大量培养,氯化铯密度梯度超速离心纯化病毒颗粒,透射电镜鉴定纯化产物。福尔马林灭活病毒颗粒后免疫Balb/c小鼠,利用细胞融合技术制备稳定分泌抗CA16单抗的杂交瘤细胞株。ELISA和免疫荧光试验分别对单抗特性进行分析。根据单抗反应特性,分析单抗在细胞ELISA、细胞免疫组化中的应用,并利用特异性抗CA16单抗建立CA16胶体金免疫层析快速检测法。结果氯化铯密度梯度离心纯化病毒颗粒电镜观察显示,病毒颗粒为二十面体立体对称球形结构,大小均匀。经免疫小鼠,获得1株稳定分泌抗CA16单克隆抗体的杂交瘤细胞株（mAb CA16-19）,该单抗为IgG2a亚型,细胞免疫荧光表明,单抗与RD宿主细胞内的CA16病毒颗粒结合。细胞ELISA显示,随着病毒滴度增加吸光度也增加。细胞免疫化学染色分析表明,单抗可与CA16病毒感染的RD结合,而不与EV71感染RD细胞和正常RD细胞反应。因此,该单抗可用于细胞ELISA... 

【文章来源】：中国人兽共患病学报. 2019,35(06)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

图１氯化铯密度梯度离心纯化ＣＡ１６病毒颗粒Ｆｉｇ．１ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＣＡ１６ｖｉｒｕｓｂｙｃｅｓｉｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅｄｅｎｓｉｔｙｇｒａｄｉｅｎｔｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ

图２透射电镜观察纯化的ＣＡ１６病毒颗粒（２５００００×）Ｆｉｇ．２ＰｈｏｔｏｇｒａｐｈｓｏｆＣＡ１６ｖｉｒａｌｐａｒｔｉｃｌｅｓａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ（２５００００×）图３ｍＡｂＣＡ１６－１９细胞免疫荧光试验（４００×）Ｆｉｇ．３ＩｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔａｓｓａｙｏｆｍＡｂＣＡ１６－１９（４００×）内有棕色着色，ｍＡｂＣＡ１６－１９不与ＥＶ７１感染ＲＤ细胞组和正常ＲＤ细胞组结合，免疫化学染色只有蓝色细胞核着色（图４）。２．５细胞ＥＬＩＳＡ细胞ＥＬＩＳＡ中，推测细胞内源性过氧化物酶影响ＥＬＩＳＡ特异性检测，因此，用不同浓度过氧化氢尿素处理细胞板。正常ＲＤ细胞组ＥＬＩＳＡ检测显示，不同浓度过氧化氢尿素处理组间吸光度值差异无统计学意义（Ｆ＝０．５８１，Ｐ＞０．０５）。ＣＡ１６感染ＲＤ细胞组ＥＬＩＳＡ检测显示，ＣＡ１６感染ＲＤ细胞后，不同浓度过氧化氢尿素处理组间吸光度值差异有统计学意义（Ｆ＝９．１５３，Ｐ＜０．０１），６０００ｍｇ／Ｌ组与０ｍｇ／Ｌ组间有统计学意义（ｔ＝－０．４２９，Ｐ＜０．０１），其他组与０ｍｇ／Ｌ组间比较均无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。细胞ＥＬＩＳＡ表明，细胞内源性过氧化物酶对细胞ＥＬＩＳＡ吸光度值影响较小，但当过氧化氢尿素浓度为６０００ｍｇ／Ｌ时，可降Ａ：ＣＡ１６感染ＲＤ细胞组；Ｂ：ＥＶ７１感染细胞组；Ｃ：正常ＲＤ

图２透射电镜观察纯化的ＣＡ１６病毒颗粒（２５００００×）Ｆｉｇ．２ＰｈｏｔｏｇｒａｐｈｓｏｆＣＡ１６ｖｉｒａｌｐａｒｔｉｃｌｅｓａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ（２５００００×）图３ｍＡｂＣＡ１６－１９细胞免疫荧光试验（４００×）Ｆｉｇ．３ＩｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔａｓｓａｙｏｆｍＡｂＣＡ１６－１９（４００×）内有棕色着色，ｍＡｂＣＡ１６－１９不与ＥＶ７１感染ＲＤ细胞组和正常ＲＤ细胞组结合，免疫化学染色只有蓝色细胞核着色（图４）。２．５细胞ＥＬＩＳＡ细胞ＥＬＩＳＡ中，推测细胞内源性过氧化物酶影响ＥＬＩＳＡ特异性检测，因此，用不同浓度过氧化氢尿素处理细胞板。正常ＲＤ细胞组ＥＬＩＳＡ检测显示，不同浓度过氧化氢尿素处理组间吸光度值差异无统计学意义（Ｆ＝０．５８１，Ｐ＞０．０５）。ＣＡ１６感染ＲＤ细胞组ＥＬＩＳＡ检测显示，ＣＡ１６感染ＲＤ细胞后，不同浓度过氧化氢尿素处理组间吸光度值差异有统计学意义（Ｆ＝９．１５３，Ｐ＜０．０１），６０００ｍｇ／Ｌ组与０ｍｇ／Ｌ组间有统计学意义（ｔ＝－０．４２９，Ｐ＜０．０１），其他组与０ｍｇ／Ｌ组间比较均无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。细胞ＥＬＩＳＡ表明，细胞内源性过氧化物酶对细胞ＥＬＩＳＡ吸光度值影响较小，但当过氧化氢尿素浓度为６０００ｍｇ／Ｌ时，可降Ａ：ＣＡ１６感染ＲＤ细胞组；Ｂ：ＥＶ７１感染细胞组；Ｃ：正常ＲＤ

【参考文献】：
期刊论文
[1]柯萨奇病毒A16型快速纯化和中和性单克隆抗体制备与鉴定[J]. 刘杨,赵向绒,关璐媛,王鑫,郭春艳,封青,卫晶晶,胡军,余鹏博.  国际检验医学杂志. 2015(14)



本文编号：3298789