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呼吸道合胞病毒表位重组蛋白F1-F/M2的原核表达、纯化及其免疫原性

发布时间:2021-07-25 15:19
  目的原核表达、纯化呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)表位重组蛋白F1-F/M2,并检测其在小鼠体内的免疫原性,为RSV亚单位疫苗的研制、疫苗所致免疫病理反应机理的研究提供参考。方法利用定点突变技术对原核表达载体pGEX-6p-1进行改造,在其GST标签前制造一个HindⅢ酶切位点;从RSV long株中扩增F1片段,从质粒pET28a-G1-F/M2中扩增F/M2基因片段,并在克隆载体pUC19的辅助下,将F1-F/M2基因连接至改造后的pGEX-6p-1载体中,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-F1-F/M2,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经6×His-tag标签蛋白纯化试剂盒纯化后,经尿素浓度梯度透析复性,SDS-PAGE分析其纯度,BCA法检测其浓度,Western blot法分析其反应原性。将纯化的重组蛋白F1-F/M2经铝佐剂乳化后,经腹腔免疫BALB/c小鼠,共3次,间隔10 d,末次免疫后10 d,采用空斑减少试验检测小鼠血清、肺组织匀浆和鼻腔冲洗液中抗RSV中和抗体水平;取小鼠脾脏,分离... 

【文章来源】:中国生物制品学杂志. 2014,27(09)CSCD

【文章页数】:6 页

【文章目录】:
1 材料与方法
    1.1 菌毒株、质粒及细胞
    1.2 实验动物
    1.3 主要试剂
    1.4 表达载体p GEX-6p-1的改造
    1.5 F1-F/M2基因片段的扩增
    1.6 重组原核表达质粒p GEX-6p-1-F1-F/M2的构建
    1.7 目的基因的诱导表达
    1.8 重组蛋白的纯化
    1.9 重组蛋白的Western blot分析
    1.1 0 重组蛋白F1-F/M2的免疫原性检测
        1.1 0. 1 动物分组及免疫
        1.1 0. 2 体液免疫水平检测
        1.1 0. 3 细胞免疫水平检测
2 结果
    2.1 RSV F1和F/M2基因片段扩增产物的鉴定
    2.2 重组表达质粒p GEX-6p-1-F1-F/M2的鉴定
    2.3 表达产物的鉴定
    2.4 纯化产物的鉴定
        2.4.1 SDS-PAGE分析
        2.4.2 浓度
        2.4.3 Western blot分析
    2.5 重组蛋白F1-F/M2的免疫原性
        2.5.1 体液免疫水平
        2.5.2 细胞免疫水平
3 讨论



本文编号:3302276

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