刚地弓形虫磷酸丙糖异构酶多克隆抗体的制备及鉴定分析

发布时间：2021-07-26 08:21

　　目的研制刚地弓形虫磷酸丙糖异构酶（TPI）兔多克隆抗体（多抗）并分析其诊断价值。方法在大肠埃希菌BL21重组表达菌表达TPI,镍柱亲和层析法纯化后与弗氏佐剂等体积混合,颈背部多点注射免疫新西兰大白兔（TPI 200μg/次,共3次）。末次免疫后2周收集兔血清, Protein A亲和层析纯化多抗。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析多抗纯度, ELISA分析多抗效价,蛋白质印迹（Western blotting）及ELISA分析多抗识别弓形虫排泄分泌抗原及纯化TPI的效果。利用多抗偶联磁珠,富集11份弓形虫感染小鼠和11份健康小鼠血清后, Dot-blot分析多抗的诊断价值,并与弓形虫循环抗原ELISA试剂盒的检测结果作比较。结果表达并纯化获得条带单一的TPI蛋白。SDS-PAGE分析结果显示,免疫兔血清经Protein A亲和纯化后获得的多抗,重链与轻链清晰可见。第3次免疫后兔血清抗体效价可达1∶280 000以上;纯化后的多抗纯度高,效价可达1∶100 000以上; Western blotting分析结果显示,纯化的多抗能识别弓形虫排泄分泌抗原中的TPI及纯... 

【文章来源】：中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2019,37(03)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

SDS-PAGE分析纯化TPI多抗250001800014000M：蛋白质标志物；1：纯化后多抗M:Proteinmarker

中国寄生虫学与寄生虫病杂志2019年6月第37卷第3期ChinJParasitolParasitDisJune2019，Vol.37，No.3化过程中丢失了参与三羧酸循环和β-氧化代谢途径所需酶的基因。糖酵解是生物获取能量最原始的一种方式，其产生的ATP是顶复门原虫能量的惟一来源［14-18］。TPI在糖酵解过程中具有催化磷酸二羟基丙酮转化为3-磷酸甘油醛的作用，对于弓形虫合成脂肪酸具有关键作用［19］。感染宿主后，弓形虫可分泌TPI至宿主体内，故在宿主体内TPI丰度较高［12］，具有较强的免疫原性［13］，容易制备高敏感性的多抗或单抗。弓形虫的检测方法包括检测弓形虫特异性抗原及抗体。检测弓形虫特异性抗体不能区分患者是新近感染还是过往感染，是活动性感染还是隐性感染。检测IgM和IgG的亲和力变化可用于活动性感染的诊断［20］，但由于IgM可长期存在于患者体内，而亲和力改变的判断阈值通常难以确定，因此具有局限性［21］。检测弓形虫循环抗原是弓形虫病诊断的理想手段，但目前尚无理想的检测靶标。本研究利用TPI重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多抗，该多抗可识别弓形虫排泄分泌抗原中的TPI，也可富集弓形虫感染小鼠血清中的TPI。弓形虫活动性感染者少，血清较难收集，因此本研究仅用弓形虫感染小鼠血清评价该多抗的诊断价值，该多抗在临床诊断中的作用还需进一步验证。该多抗可为构建高敏感性、高特异性的弓形虫活动性感染检测方法奠定基础，可作为现有弓形虫循环抗原检测试剂盒检测方法的有效补充，对促进弓形虫病的防治、优生优育及人民健康水平的提高，具有积极的作

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3303200