幼兔颅盖骨成骨细胞的分离培养及鉴定

发布时间：2021-08-28 06:22

　　背景:成骨细胞的提取分离尚无公认的高效简便的实验方法。目的:探讨用改良酶消化法体外分离、培养并鉴定新西兰幼兔颅盖骨成骨细胞的实验方法。方法:实验利用成纤维细胞胰酶消化时脱壁早,终止消化后贴壁快的特点,采用改良酶消化法分离3 d龄新西兰幼兔颅盖骨成骨细胞并用差速贴壁法纯化培养。倒置显微镜每日观察细胞形态及其生长状况,采用MTT法检测细胞增殖情况并绘制细胞生长曲线,测定碱性磷酸酶含量,免疫组织化学染色法检测Ⅰ型胶原、骨钙素,Runt相关转录因子2（Runt related transcription factor 2,RUNX2）表达,茜素红染色矿化结节等对成骨细胞及其生物化学特性进行鉴定。结果与结论:（1）成功分离提取并差速贴壁法纯化培养成骨细胞;（2）分离培养的成骨细胞贴壁生长,显示正常的成骨细胞形态和生长特征;细胞增殖能力良好;（3）细胞碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、骨钙素、RUNX2染色均阳性,常规培养21d茜素红染色形成矿化结节;（4）结果证实,改良酶消化法培养出的成骨细胞具有典型的成骨细胞特征,成分单一,存活率高。 

【文章来源】：中国组织工程研究. 2019,23(07)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

成骨细胞免疫细胞化学染色成骨相关蛋白表达(A，B：×100，C：×200)

4Alkalinephosphataseactivityofpassage3osteoblasts图注：图A为Ⅰ型胶原表达；B为骨钙素表达；C：RUNX2表达。图5成骨细胞免疫细胞化学染色成骨相关蛋白表达(A，B：×100，C：×200)Figure5Expressionofosteogenesis-relatedproteinsinosteoblastsdetectedbyimmunohistochemicalstaining(A,B,×100,C,×200)图注：细胞排列呈以矿化结节为中心的“火山口”样、旋涡状排列。0.450.400.350.300.250.200.150.100.050吸光度值1357911培养时间(d)图6成骨细胞茜素红染色结果(×200)Figure6Alizarinredstainingofosteoblasts(×200)

【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠颌下腺上皮细胞的体外培养及鉴定[J]. 张晓娟,段梦园,李娟,郭磊,鞠瑞,朱蕾,叶菜英.  基础医学与临床. 2018(02)
[2]乳兔成骨细胞原代培养与鉴定:改良胶原酶与胰酶的分段消化[J]. 杨森,冯付明,王银辉.  中国组织工程研究. 2014(38)
[3]兔牙髓细胞的体外增殖及鉴定[J]. 马蓉,王艳梅,庄友梅,木合塔尔·霍加.  中国组织工程研究. 2012(49)
[4]成骨细胞的体外培养与鉴定[J]. 王勇平,廖燚,蒋垚.  中国组织工程研究与临床康复. 2011(33)
[5]Effect of type I collagen on the adhesion, proliferation, and osteoblastic gene expression of bone marrow-derived mesenchymal stem cells[J]. 刘刚,胡蕴玉,赵建宁,吴苏稼,熊卓,吕荣.  Chinese Journal of Traumatology. 2004(06)



本文编号：3367982