重组Ac-hIL12病毒遗传稳定性研究及hIL-12在毕赤酵母中的表达

发布时间：2021-08-29 06:45

　　杆状病毒载体表达系统是一个很有应用价值的外源基因表达系统,利用该系统大规模生产外源蛋白,其中一种主要的限制因素就是传代效应的影响。表现为病毒在培养细胞中复制多代后,由于缺损干扰颗粒的聚集导致病毒和/或目的蛋白产量的显著下降。本实验研究了重组病毒Ac-hIL12在Sf9连续传代过程中是否会导致外源基因本身的突变。 将表达人白细胞介素12（human interleukin-12,hIL-12）的重组杆状病毒（Ac-hIL12）经空斑纯化后,在草地贪夜蛾Sf9细胞中进行连续无稀释传代到P₅₅代,收集被P₁₅、P₂₅、P₃₅、P₄₅、P₅₅代重组病毒感染的细胞,抽提胞内病毒（ICV）DNA。根据重组病毒构建的原理,在P35 cDNA和P40 cDNA的3′末段设计一对引物进行PCR,扩增出了包括P35 cDNA、Polyhedrin启动子、P10启动子和P40 cDNA序列在内的全长约2.0kb片段,克隆至T Vector进行序列测定后发现,在第P

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P35cDNA突变区域的序列分析

IRES，p35不Ilp40a的pCR扩增一3ThePCRamPlieationofP4O.IRES、P35andPationofP40，IRES，P35nadP40aresPeetively.or克隆R产物p35eDNA，p4oeDNA和IRES序肠杆菌后，随机挑取单菌落进行鉴定。首选，然后分别提取质粒用各自引物上el)，pMD18/IRES(PSel、Ncol)，pMD18/p琼脂糖电泳检测酶切鉴定的结果(Fig.2一5)分泌肤。一faCtor的p4oaeDNA构建

进行胶回收后，克隆到pMD18T载体，并用Ncol和Notl进行双酶切鉴定(Fl.g2一5Lna3e)。并将酶切消化得到的克隆片段p400cDNA进行回收纯化，用于重组表达质粒的构建。图2一spMDIS/p35、pMD18八RES和pMDIS/p4oQ的酶切鉴定Fig.2一5TheresrtietionnaalysisofthePMD18/P35，PMD18/IRESandPMD18/P40a

【参考文献】：
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